PCR-STR亲子鉴定1课件.pptVIP

方法一：DNA测序法 步骤： ①材料处理 破碎细胞壁以释放细胞内容物破坏细胞膜使DNA释放到提取缓冲液中DNA释放后，尽量确保DNA的完整性 ②分离纯化 （去除杂质包括大量的RNA、蛋白质、多糖、单宁和色素等） ③SSR（Simple Sequence Repeat） 引物设计 根据CMD(Cotton Marker Database)已公布的序列来设计相对SSR引物。 ④PCR扩增 ⑤琼脂糖凝胶电泳 ⑥挖胶 ⑦回收试剂盒、回收DNA片段 ⑧与特定质粒形成重组DNA分子 ⑨导入大肠杆菌，筛选白斑 ⑩提取质粒DNA ?DNA测序、比对 PRC扩增 比对示意图 DNA的提取 CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种阳离子去污剂，具有从低离子强度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性，在这种条件下，蛋白质和中性多聚糖留在溶液中。在高离子浓度下，CTAB与蛋白质和除大多数酸性多聚糖以外的多聚糖形成复合物，但不能沉淀核酸。在一定的盐浓度下，DNA、蛋白质与多糖在CTAB溶液中溶解度不一样而达到去多糖的目的。 生物体内的DNA与蛋白质结合在一起，提取时需除去其结合的蛋白质，然后再将DNA与RNA分开，并进一步纯化。此外需抑制 DNAase 的活性以防DNA被降解。基本环节： * PCR-STR法亲子鉴定  一、亲子鉴定定义 二、原始的亲子鉴定方法 三、现代的亲子鉴定方法 一、亲子鉴定的定义 亲子鉴定就是利用医学、生物学和遗传学的理论和技术，子代和亲代的形态构造或生理机能方面的相似特点，分析遗传特征，判断父母与子女之间是否是亲生关系。 二、原始的亲子鉴定方法 （1）外貌对比 　　 由于遗传的原因，父子、母子、兄弟姐妹之间的长相、肤色等一般都会有某些相似的地方，通过外貌长相的对比来确定亲子关系恐怕是最原始的方法，但这样方法只是一种猜测、判断，作为一种参考，不具有权威性。 我国演员林永健 加拿大韩裔演员吴珊卓 （2）滴骨验亲 滴骨验亲法就是将生者的血液滴在死人的骨骸上，若血液能渗透入骨则断定生者与死者有血源关系，否则就没有。 三国时期的吴国人谢承所撰的《会稽先贤传》就记载有以弟血滴兄骨骸之上认领长兄尸骨的事例；（《南史·豫章王综传》也记载有以子之血滴于父骨之上验亲的事例； 至宋代，著名法医学家宋慈将滴骨验亲法收入《洗冤集录》中。据从现代的观点来看，这种方法并不科学，但开创了用血型鉴别血源关系的先河。 （3）滴血验亲 　　 滴血验亲法又称合血验亲法，就是将小孩的血与大人的血液放在一起，如果能融在一起，就是父母亲生的，否则就不是亲生的。 这种认样方法曾在中国宋代的法医著作里里记载过。这种方法没有科学依据，亲子关系的血液不一定能融合，而非亲子关系的血倒有可能融合 三、现代的亲子鉴定方法 （1）血型测试 ??　 血型测试进行亲子鉴定就是通过对血型的检验比对来确定亲子关系。依据孟德尔遗传定律，人类的血型是按照遗传基因传给下一代，故一定血型的父母所生子女也具有相应的血型。 　　 用于血型检验来鉴别亲子关系的血型系统有：ABO 、MN 、Rh、Ss 、hp等21个血型系统 。 　　 检验的血型系统越多，其准确性就越高，如果血型检验的结果表示无遗传关系，可作出否定亲子关系的结论，但结果存在遗传关系，也不能完全确定是亲子关系 返回 （2）染色体多态性鉴定 染色体多态性，又称异态性，是指正常人群中常见的各种染色体形态的微小变异（如：随体增大、重复或缺失，着丝粒区的荧光强度变异等）。 这种多态是可以遗传的。这项技术就是利用其形态来鉴定亲子关系，这要靠技术人员的主观判断，其准确率也不尽如人意。 （3）DNA鉴定 鉴定亲子关系目前用得最多的是DNA分型鉴定,包括:序列多态性和长度多态性。如:人的血液、毛发、唾液、口腔细胞及骨头等都可以用于亲子鉴定，十分方便。 常用方法有DNA指纹法、SNP-PCR法、PCR-STR法等。 1.DNA指纹法 DNA指纹法的技术原理，又称RFLP DNA指纹分析技术，将生物检材中细胞核的DNA分离出来，用特定的限制性内切酶消化，后经电泳分离，Southern印迹转移，再用已知序列小卫星DNA探针根据碱基互补原则进行杂交，用放射自显影等技术显示出一系列不等距离，相互间隔的多条电泳谱带组成的高度多态性图谱，实质为DNA的限制性片段长度多态性（RFLP）图像，因各人不同（同卵双生除外），比对结果类似指纹。 优点：此技术可检测位点多、特异性高、稳