尿液的其他检查2版课件.ppt

RIA模式图 标记HCG抗原 未标记HCG抗原 抗HCG抗体 HCG测定法 原理： 用抗HCG抗体包被聚苯乙烯酶标孔，加入待测样品或HCG标准品后，样品中的HCG与包被在小孔上的抗体反应，形成抗体-抗原复合物，再加入酶标抗体，形成抗体－抗原－酶标抗体复合物，即双抗体夹心法，再加酶作用底物显示剂，显色，可用肉眼或酶标光度计比色定量。 HCG测定法 3)酶联免疫吸附试验（ELISA） 4)胶体金标记免疫试验 金标试验原理 胶体金是由氯化金与还原剂反应形成的一种胶体颗粒，其颜色随颗粒大小呈桔红色到紫红色变化。 胶体金具有吸附蛋白质的特性，吸附机制可能是胶体金颗粒表面带负电荷与蛋白质的正电荷基团靠静电相互吸引而形成牢固结合。 被吸附在胶体金颗粒表面的蛋白质（抗体）不影响其活性。 免疫胶体金法原理 将羊抗鼠IgG（阴性对照）和羊抗人HCG抗血清分别固定在特制的纤维素试带呈上下排列的两条线，试带条中均匀含有胶体金标记的鼠抗人β-HCG单克隆抗体和无关的金标记鼠IgG。试验时，将试带的下端浸入尿液中，迅速取出。 金标试验 HCG金标试纸条 带条中均匀含有： 胶体金标记鼠抗人β-HCG单克隆抗体 胶体金标记鼠IgG 。 1：羊抗人HCG抗体（检测线） 2：羊抗鼠IgG（阴性对照线） 胶体金标记鼠IgG随着尿液上行，到达阴性对照处与羊抗鼠IgG形成抗原抗体复合物而显色，作阴性对照 1 2 金标试验 尿中β-HCG与胶金标记的鼠抗人β-HCG结合形成免疫复合物 随层析作用向上移动，至检测线与羊抗人HCG抗体结合而聚集显色 尿液在上行的过程中，尿中β-HCG与金标记的鼠抗人β-HCG结合形成免疫复合物，随层析作用向上移动，至检测线与羊抗人HCG抗体结合而聚集显色，随着尿液上行，金标记鼠IgG到达阴性对照处与羊抗鼠IgG形成金标记的抗原抗体复合物而显色作阴性对照。 金标试验 金标试验 （标本中）β-HCG +金标记的鼠抗人β-HCG β-HCG-金标记的鼠抗人β-HCG-羊抗人HCG抗体复合物 β-HCG-金标记的鼠抗人β-HCG复合物+羊抗人HCG抗体 （检测线） 金标试验结果 含HCG的尿液试带上可显示上下两条紫红色线条。 金标试验 而阴性标本则只显示上边一条紫红色线条。 金标试验结果 胶体金免疫法与RIA、ELISA等方法相比，有许多优点： 它不需ELISA法中所要求的作用的底物和显色剂，使操作更简便； 胶体金标抗体在冻干状态下室温储存较稳定，有效期长； 灵敏度高，10-25IU/L 金标试验 金标试验方法学评价 HCG测定临床意义 早期妊娠诊断 一般常用的HCG检测方法能在妊娠35天时易显阳性反应，阳性率达98％以上，一些灵敏度高的试验可在更早期作出诊断，如胶体金试验，其灵敏度高，能检出8-10天妊娠尿中HCG。 对异常妊娠及与妊娠有关情况的观察 宫外孕时，60％HCG阳性率，有助于与其它急腹症的鉴别；不完全流产者子宫内尚有胎盘组织存活时HCG(+) 在滋养细胞肿瘤诊疗方面的应用： 葡萄胎、恶性葡萄胎、绒毛膜癌等疾病时，尿中HCG显著增高，可达10万U/L以上，可用稀释试验诊断并与正常妊娠鉴别 HCG增高还可见于某些恶性肿瘤，如卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、胰腺癌、胃癌、肝癌、肺癌等血中HCG也可升高，因此可将 HCG看作是肿瘤标志物之一。但必需结合临床情况和其他检查结果综合分析判断。 7.尿沉渣自动化分析仪 尿液干化学检测方法的局限性 例如： 白细胞：只能检测含有酯酶的中性粒细胞 红细胞：通过检测血红蛋白来反映红细胞，有 许多因素会引起结果的假阳性和假阴 性 细菌： 只能检测含有亚硝酸盐还原酶的细菌 …… 定性结果，不能用于疗效的监测 结论：不能代替镜检 镜检法的缺点 费时费力 重复性差 不同检验人员间的差异大 实验室间结果不具可比性 难以标准化 离心的尿量不同 离心速度和时间不同 尿沉渣重悬的液量不同 尿沉渣重悬的方法不同 镜检一滴沉渣的液量不同 盖片或计数板的差异 视野数目和位置的差异 成份识别上的人员差异 显微镜视野大小的差异 用UF尿沉渣仪作筛选的好处 工作效率高，可以定量。 重复性良好，CV%比手工低10倍左右 临床可以获得更多的信息。 检验的质量将得到提高，信息更加准确。 尿液检查报告反馈的时间大大缩短，效率提高。 特点 简化工作流程 无需人工干预 结果准确、重复性好 定量数据 标准化检测 可检测红细胞形态信息 原理 全自动尿沉渣分析仪检测分析中，应用了流式细胞和电阻抗分析的原理。 在测试分析前，需先用菲啶与羰花氰燃料对尿液中有形成分进行染色。 尿液中细胞等经荧光染色后，在鞘流液的作用下，形成单个、纵列细胞流、快速通过氩激光检测区，仪器