南极嗜冷杆菌脂肪酶的原核可溶性表达优化及酶学性能-林业工程学报.PDF

－ 林业工程学报，２０１６，１（５）：７１ ７７ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ － Ｄｏｉ：１０．１３３６０／ ｊ．ｉｓｓｎ．２０９６ １３５９．２０１６．０５．０１３ 南极嗜冷杆菌脂肪酶的原核可溶性 表达优化及酶学性能表征 刘弘忍，王亮亮，何琦阳，王飞，李迅∗ （南京林业大学江苏省林业资源高效加工利用协同创新中心，江苏省生物质绿色燃料与 化学品重点实验室，南京 ２１００３７） 摘　 要：脂肪酶广泛应用于食品加工、生物柴油制备等领域。 为了有效提高微生物脂肪酶的可利用度，将来源于 南极嗜冷杆菌属（ａｎｔａｒｃｔｉｃ ｐｓｙｃｈｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ，Ｐｓｙｃｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ ７１９５）的嗜冷脂肪酶（Ｌｉｐ７１９５）在大肠杆菌 系统中进行高效可溶性表达优化，并进行酶学性能表征。 首先对Ｌｉｐ７１９５基因进行大肠杆菌偏好密码子优化， 并通过添加多聚阳离子氨基酸标签等手段，优化重组Ｌｉｐ７１９５ 的可溶性表达。 结果显示，添加多聚阳离子氨基 酸标签的方法有效增加了目的蛋白的可溶性。 对纯化后的重组酶进行酶学定性，结果显示，在４０ ℃、ｐＨ９０ 时， 重组Ｌｉｐ７１９５酶活性最高，比酶活最高达１０９ Ｕ／ ｍｇ；在３０～４０ ℃、ｐＨ ８０～１００ 范围，重组Ｌｉｐ７１９５具有较好的 ２＋ 稳定性；Ｃｏ 对酶活力有激活作用。 研究结果表明，在保持嗜冷脂肪酶特有的酶学性质基础上，添加多聚阳离子 氨基酸标签有效改善了其在原核表达中易形成包涵体的问题。 关键词：嗜冷脂肪酶；可溶性表达；多聚氨基酸标签；定点突变；酶学性质 － － － 中图分类号：Ｑ７８６　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 文章编号：２０９６ １３５９（２０１６）０５ ００７１ ０７ Ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｓｏｌｕｂｌｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆ ａ ｃｏｌｄ⁃ａｄａｐｔｅｄ ｌｉｐａｓｅ ｆｒｏｍ ｐｓｙｃｈｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＬＩＵ Ｈｏｎｇｒｅｎ，ＷＡＮＧ Ｌｉａｎｇｌｉａｎｇ，ＨＥ Ｑｉｙａｎｇ，ＷＡＮＧ Ｆｅｉ，ＬＩ Ｘｕｎ* （Ｊｉａｎｇｓｕ Ｃｏ⁃Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ａｎｄ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ， Ｎａｎｊｉｎｇ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＪｉａｎｇｓｕＫｅｙ Ｌａｂ ｏｆ Ｂｉｏｍａｓｓ⁃Ｂａｓｅｄ Ｇｒｅｅｎ Ｆｕｅｌｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００３７，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｌｉｐａｓｅ ｉｓ ａｎｙ ｅｎｚｙｍｅｔｈａｔｃａｔａｌｙｚｅｓｔｈｅｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｏｆｌｉｐｉｄｓ，ａｎｄｉｓｔｈｅｓｕｂｃｌａｓｓｏｆｔｈｅｅｓｔｅｒａｓｅｓ． Ｇｉｖｅｎｉｔｓｅｘ⁃ ｃｅｌｌｅｎｔｆｕｎｃｔｉｏｎｓ，ｌｉｐａｓｅｐｌａｙｓａｎｉｎｄｉｓｐｅｎｓａｂｌｅｒｏｌｅｉｎｍａｎｙｉｎｄｕｓｔｒｉａｌａｒｅａｓｓｕｃｈａｓｆｏｏｄｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇａｎｄｂｉｏｄｉｅｓｅｌｐｒｅｐａ⁃ ｒａｔｉｏｎ． Ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ，ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｕｌｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｐａｓｅ ｆｒｏｍ ｍｉｃｒｏｂｅｓ，ａ ｐｓｙｃｈｒｏｐｈｉｌｉｃ ｌｉｐａｓｅ ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ ａｎｔａｒｃｔｉｃ ｐｓｙｃｈｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ，Ｐｓｙｃｈｒｏｂａｃｔ