桂林猫儿山地区Bt菌株的筛选及其抑菌成分的热稳定性.PDF

第３５卷 第２期 桂 林 理 工 大 学 学 报 Ｖｏｌ３５Ｎｏ２ ２０１５年５月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＧｕｉｌｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｍａｙ　２０１５  文章编号：１６７４－９０５７（２０１５）０２－０３４８－０５　　　　　 ｄｏｉ：１０３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ１６７４－９０５７２０１５０２０２２ 桂林猫儿山地区Ｂｔ菌株的筛选及其 抑菌成分的热稳定性 罗　稳，卢梦梦，郝再彬 （桂林理工大学 化学与生物工程学院，广西 桂林　５４１００４） 摘　要：通过对桂林猫儿山原生态地区采集的１６６份土样样品进行筛选，分离到含有新的杀虫晶体蛋白基 因、所产抑菌物质热稳定性好的苏云金芽胞杆菌菌株。采用温度筛选法对土样进行初筛和复筛，结合 ＳＤＳＰＡＧＥ分析和牛津杯法抑菌试验来挑选目的菌株。从采集的１６６份天然土壤样品中分离出４９株苏云金 芽胞杆菌，出菌率２９５％。光学显微镜观察发现有大菱形、小菱形和不规则晶体类型。用ＳＤＳＰＡＧＥ分析 了其中１４株野生菌株的杀虫晶体蛋白表达谱，发现１４株均表达了１３０和６５ｋＤ的蛋白，其中有７株表达 约９０ｋＤ蛋白、２株表达３５ｋＤ和６株表达３０ｋＤ的蛋白。对其中８株表达不同分子量蛋白的菌株发酵４４ ｈ，取其发酵液的上清液进行抑菌活性成分热稳定性检测，发现其热稳定性相差较大，９５℃水浴加热２ｈ 处理后，除２４７－１外，其他几株产生的抑菌物质全部失活。菌株２４７－１不仅产生耐热的ＺｗｉｔｔｅｒｍｉｃｉｎＡ， 可能还产生其他热敏感性的抑菌成分。 关键词：苏云金芽胞杆菌；杀虫晶体蛋白；抑菌活性；热稳定性 中图分类号：Ｓ４７６１１　　　　　　　　　　　　　　文献标志码：Ａ ［７］ 苏云金芽胞杆菌 （Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ，Ｂｔ） 增效作用达 １５～１０００倍 ，而且还有较强的抑 是一种在自然界分布广泛的革兰氏阳性菌。Ｂｔ在 菌活性。ＺｗＡ作为增效因子来提高Ｂｔ晶体蛋白的 产生芽胞的过程中，除了同时产生对多种害虫有 杀虫活性，可以减少Ｂｔ制剂的使用量，延缓害虫 杀虫活性的伴胞晶体蛋白外，还产生多种活性物 抗性的产生，拓宽杀虫谱［８－９］。因此，进一步开 质，如：营养期杀虫蛋白、ＺｗｉｔｔｅｒｍｉｃｉｎＡ、苏云 发出高毒力的Ｂｔ杀虫剂与转基因抗虫作物，分离 金素、溶血素、肠毒素、 外毒素、自身诱导物 出具有高效和广谱杀虫基因的野生型Ｂｔ菌株，对 α ［１－３］ 抑制蛋白以及碱性几丁质酶等 。苏云金芽胞 粮食安全来说显得尤为重要和迫切。 杆菌作为一种重要的杀虫微生物，在农业生物防 Ｂｔ广泛存在于自然界中，从土壤、水源、昆虫 ［１０］ 治方面越来越受到重视。由于Ｂｔ晶体蛋白对害虫 尸体、野生动植物表面都可以分离出Ｂｔ菌 。其 具有特异的杀虫活性，对人畜没有危害且不会污 中，土壤作为微生物生存的最佳介质，是 Ｂｔ菌株 染环境等优点，伴胞晶体蛋白已经成为一种有效 的重要来源，并且样品采集地的气候 、海拔和植 ［１１］ 的微生物杀虫剂，广泛应用于田间害虫的生物防 被生长情况也会影响到Ｂｔ菌株的分布 。关于桂 治［４］。有研究发现，某些 Ｂｔ菌株产生的水溶性抗 林地区的Ｂｔ研究始于２００９年，桂林西山公园、叠彩 生素 公园等部分公园 ［１２］ Ｚｗｉｔｔｅｒ