RapidChek SELECET方法和GBT13091―2002方法检测饲料中沙门氏菌比较研究.docVIP

RapidChek SELECET方法和GBT13091―2002方法检测饲料中沙门氏菌比较研究 　　摘要 进行RapidChek SELECET方法和GB/T13091―2002方法检测饲料中沙门氏菌的效果研究，结果表明：相同的样品采用2种方法检测出的结果完全相同，且RapidChek SELECT检测时间比GB/T13091―2002检测时间少。 　　关键词 RapidChek SELECET；GB/T13091―2002；饲料；沙门氏菌；检测 　　中图分类号 TS201.6 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）10-0258-02 　　Comparison of Detection of Salmonella in Fodder by RapidChek SELECET and GB/T 13091―2002 Method 　　PAZILAITI?YIMING ALITENGCAISIKE 　　（Veterinary Feed Monitor in Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi Xinjiang 830000） 　　Abstract The effects of using RapidChek SELECET and GB method to detect salmonella in fodder were done，the results showed that，the detected results were exactly the same with the same samples by 2 methods，and the detection time of RapidChek SELECT was less than that of GB/T13091-2002. 　　Key words RapidChek SELECET；GB/T13091-2002；fodder；salmonella；detection 　　RapidChek SELECT检测方法的核心是将噬菌体作为选择性试剂，噬菌体是作用于细菌的病毒，可以攻击与试剂有交叉反应的杂菌，减少假阳性结果的产生，提高检测特异性；同时噬菌体还会攻击其他竞争性细菌，为沙门氏菌快速生长营造最佳环境，提高检测的灵敏度[1-2]。 　　专利配方的培养基与最新的RapidChek SELECT侧向层析试纸条连用。试纸条包含一个专用沙门氏菌抗体承载板，以提高整个产品检测性能。如果只有1条质控线出现表示阴性结果；质控线和检测线都出现表示阳性结果。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　RapidChek SELECT试剂盒由罗玛实验室提供。缓冲蛋白胨水（BP）、氯化镁-孔雀绿增菌液（RV）、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）、选择性划线固体培养基、酚红煌绿琼脂、DHL琼脂、营养琼脂、三糖铁琼脂、尿素琼脂、赖氨酸脱羧试验培养基、β-半乳糖苷酶试剂、V-P反应培养基（V-P培养基、计算溶液、a-萘酚乙醇溶液、氢氧化钾溶液）、靛基质反应培养基（胰蛋白胨色氨酸培养基、柯凡克试剂）、半固体营养琼脂、盐水溶液、沙门氏菌因子O、VI、H型血清。对照菌株：鼠伤寒沙门氏菌。供试样品：配合饲料、鱼粉、骨粉、豆粕、棉粕、牛奶精料补充料等20个饲料样品。 　　1.2 试验方法 　　2种检测方法分别见图1、2。 　　1.2.1 GB/T13091―2002检测步骤。非选择性增菌：每种样品称取25 g（mL）经过均质后接种到225 mL缓冲蛋白胨水中进行预增菌，（36±1） ℃培养16～20 h。选择性增菌培养：以上增菌液GB/T13091―2002标准规定接种到2种增菌液，一是亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）（36±1）℃培养18～24 h；二是四硫酸钠煌绿增菌液（TTB）42 ℃培养18～24 h。分离培养和鉴定：将样品增菌液接种到分离平板酚红煌绿（FH）、DHL琼脂，（36±1）℃培养18～24 h；阳性菌接种到XLD、显色培养基、亚硫酸铋平板上；营养琼脂（增菌）、伊红美蓝培养基接种混合菌（目的筛选大肠杆菌），血琼脂平板接种混合菌（目的筛选金葡）。对可疑菌落进行进行生化试验、血清学鉴定。 　　1.2.2 RapidChek SELECT检测步骤。每种样品称取25 g（mL），接种到RapidChek SELECT沙门氏菌培养基（含补充剂），在42 ℃下孵育16～22 h。取0.1 mL增菌液加入1 mL RapidChek SELECT二次培养基中，在42 ℃下孵育16～22 h。将试纸条放入待测样品中，10 min后读取结果（1条线为阴性，2条线为阳性）。挑选出阳性样品进行血清学鉴定和生化试验