酿酒酵母耐热元器件的筛选.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３５（３）：７５８３ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 酿酒酵母耐热元器件的筛选 １ １ １ ２ １，２ 孙　欢 　贾海洋 　冯旭东 　刘月芹 　李　春 （１北京理工大学生命学院　北京　１０００８１　２天津大学系统生物工程教育部重点实验室　天津　３０００７２） 摘要　以提高酿酒酵母耐热性、降低乙醇发酵过程控温能耗成本为目的，通过分析嗜热栖热菌 （Ｔｈｅｒｍｕｓｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ）ＨＢ８热激蛋白基因，设计并构建了５个热激蛋白元器件，并导入酿酒酵母。 通过梯度升温培养筛选出性能较好的耐热元器件ＦＢＡ１ｐｇｒｏｅｓＳＬＭ５ｔ，并利用恒定高温培养进一 步验证了含有该元器件的酿酒酵母工程菌Ｓ．ｃＧｒｏＥＳ具有良好的耐热性，研究表明在４２℃培养 ４８ｈ的存活率是对照的３倍。此外，ＦＢＡ１ｐｇｒｏｅｓＳＬＭ５ｔ还能提高酵母的抗氧化性，４２℃下菌株 Ｓ．ｃＧｒｏＥＳ的ＲＯＳ水平比对照低３７．６％，ＨＯ 处理１ｈ后存活率是对照的１．６２倍，说明耐热元 ２ ２ 器件在缓解热胁迫的同时对细胞的抗氧化性也有帮助。耐热工程酿酒酵母Ｓ．ｃＧｒｏＥＳ，其４０℃发 酵乙醇产量相对于３０℃对照和４０℃对照分别提高了２５％和１３．８％。嗜热菌热激蛋白的引入可 以明显提高酿酒酵母的耐热性及其乙醇合成效率。 关键词　酿酒酵母　耐热性　热激蛋白　乙醇　抗氧化性 中图分类号　Ｑ８１５ 　　纤维素乙醇作为发展力度最强的生物能源已成为 胞及其体内酶的活力，从而更有利于生产。 国内外研究热点。利用丰富廉价的木质纤维素生产乙 　　目前，提高酿酒酵母耐热性已成为国内外的研究 醇可大幅降低原料成本。但是纤维素发酵生产乙醇的 热点。传统的驯化法，稳定性差，不能满足大规模生 方法无论是水解与发酵分段法，还是同步糖化发酵法， 产。通过改变酿酒酵母本身的转录因子或蛋白表达提 最适酶解温度约为５０℃。而酿酒酵母的最适发酵温度 高酿酒酵母的耐热性，这种方法受限于菌株本身的耐 ［７８］ 一般为３０℃。因此，纤维素经高温酶解后，需要降到酵 热机制效果并不明显 。据报道通过引入外源耐热 母的发酵温度进而增加了生产成本。所以，纤维素乙 ［９］ 基因可以有效提高微生物的耐热性 ，但是目前该领 ［１２］ 醇工业急需提高酿酒酵母耐热性 。然而目前大部 域的研究处于初始阶段，并且应用于酿酒酵母不同类 分酿酒酵母不能耐受高温，在发酵过程会受到高温胁 型的高温发酵及提高其高温下乙醇合成效率还未见有 迫的影响，使蛋白变性，导致细胞的存活力下降［３］。同 文献报道。 时，高温胁迫会诱导细胞产生大量的活性氧自由基 　　嗜热栖热菌（Ｔｈｅｒｍｕｓｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）属于古生菌，其 ［４］ ［１０］ （ＲＯＳ），从而对细胞产生双重危害 。这就需要消耗 最适生长温度为８０℃，有一套完整的耐热机制 ，最 大量的冷却水，因此提高酵母耐热性不仅可以大幅度 主要的耐热机制是其含有丰富的热稳定性保护蛋白— ［５］ 热激蛋白（ＨＳＰ）。ＨＳＰ对于揭示极端嗜热古菌特殊生 降低冷却成本 ，而且微生物体内酶的最适催化温