基于抗原包被的微孔板式化学发光酶免疫分析法测定人尿中的雌三醇.PDFVIP

中国科学: 化学 2010 年 第40 卷 第6 期: 694 ~ 703 SCIENTIA SINICA Chimica SCIENCE CHINA PRESS 论 文 基于抗原包被的微孔板式化学发光酶免疫分析法 测定人尿中的雌三醇 ①③ ③ ② ② ② ③* 方卢秋 , 祁嫒嫒 , 李振甲 , 唐宝军 , 胡国茂 , 林金明 ① 长江师范学院化学化工学院, 涪陵 408100 ② 北京科美东雅生物技术有限公司, 北京 100094 ③ 清华大学化学系, 北京 100084 *通讯作者, E-mail: jmlin@ 收稿日期: 2010-02-17; 接受日期: 2010-03-31 摘要 将雌三醇-6-(O- 羧甲基) 肟(E3-6-CMO) 与牛血清白蛋白(BSA)形成的偶联物 关键词 E3-6-CMO-BSA 物理吸附于聚苯乙烯微孔板孔内作为固相抗原, 与雌三醇(E3)标准溶液 化学发光酶免疫分析 辣根过氧化物酶 或者水解尿样中待测 E3 通过竞争法进行免疫反应. 以对碘苯酚增强的辣根过氧化物酶 抗原包被 (HRP)催化鲁米诺-过氧化氢化学发光体系作为信号检测系统, 建立了一种高通量、简便 雌三醇 快速、灵敏稳定的化学发光酶免疫分析方法用于测定人尿中E3 的含量. 考察和优化了包 人尿 被液的酸碱性、抗原包被浓度、酶标抗体稀释比例及用量、温育时间、化学发光底物用 量及化学发光反应时间的影响. 在最优实验条件下, 方法的灵敏度为 0.20 ng/mL, 批内 和批间变异系数均在 15%之内, 低、中、高浓度加标水解尿样的平均回收率分别为 107.9%、100.9%和91.2%. 使用抗原包被法和抗体包被法同时对10 份水解尿样进行测定, 结果显示相关性良好, 相关系数为0.9984, 表明本方法可以满足临床检测的要求. 1 引言 临床中E3 主要用于同期发情和家畜促生长以及提高 饲料转化率, 但长期摄入含雌激素较高的动物性食 雌三醇(estriol, E3, 化学名: 1,3,5[10]-雌三烯- 品会导致女性化、性早熟、抑制骨骼和精子发育, 因 3,16α,17β-三醇, 分子结构见图 1)是人体内具有弱 此, 我国已禁止在食品动物饲养中使用E3[4]. 化妆品 雌激素活性的物质, 属类固醇激素, 是雌二醇和雌酮 中雌激素的检测主要是针对雌酮、雌二醇、E3 以及 的代谢产物. 雌性激素由卵巢、肾上腺皮质和睾丸分 炔雌醇等[5]. 此外, E3 对骨质疏松症有预防作用, 可 泌, 妇女妊娠三个月后主要由胎盘分泌, 雌性激素共 提高癌症患者白细胞数量[6], E3 也是辐射防护药物, 同维持女性生殖周期及女性生理特征. 临床上测定 能推迟和减轻放射病及其症状, 争取治疗和抢救病 尿中E3 排出量作为判断晚期妊娠胎儿发育情况的一 人的时间, 缩短病程[7], E3 还是重要的环境污染物, 项重要指标, 对胎盘功能不全症的诊断具有重要意 属于能破坏内分泌系统的环境荷尔蒙物质之一[4, 8] . 义[1]. E3 可促进阴道上皮细胞增生、表层细胞角化, 因此, 研究和建立快速准确、操作简单、高通量和高