偏肿革裥菌漆酶基因克隆及启动子序列分析-华南农业大学学报.PDFVIP

第３４卷 第４期 华南农业大学学报 Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．４ 　　　　　　　　　　 　　 　　　　　　　　 ２０１３年１０月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｃｔ．２０１３ 偏肿革裥菌漆酶基因克隆及启动子序列分析 １，２ ２ 郑苗苗 ，池玉杰 （１齐齐哈尔大学生命科学与农林学院，黑龙江 齐齐哈尔１６１００６； ２东北林业大学林学院，黑龙江哈尔滨 １５００４０） 摘要：以优化后的漆酶培养基为基础，通过ＲＴＰＣＲ和ＲＡＣＥ技术相结合，从偏肿革裥菌Ｌｅｎｚｉｔｅｓｇｉｂｂｏｓａ菌株中获得 编码漆酶基因的ｃＤＮＡ及ＧｅｎｏｍｉｃＤＮＡ的全长序列，ＧｅｎｏｍｉｃＤＮＡ大小为２１６５ｂｐ．通过比较该漆酶基因的ｃＤＮＡ 和ＧｅｎｏｍｉｃＤＮＡ的全长序列，发现该基因包含１１个外显子和１０个内含子．ｃＤＮＡ序列的全长为１８７３ｂｐ，其中包含 一个完整的ＯＲＦ，长度为１５６３ｂｐ，编码５２０个氨基酸．序列在氨基酸水平上与彩绒革盖菌Ｔｒａｍｅｔｅｓｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ的相似 性评价最高，相似性达８３％．通过ＳＥＦＡＰＣＲ的方法，扩增得到漆酶基因起始密码子上游长９８６ｂｐ的启动子序列． 分析表明，该启动子区域上除分布有ＴＡＴＡｂｏｘ、ＣＡＡＴｂｏｘ以及ＡＰ２等基本的转录起始元件外，还存在有多个潜在 的顺式作用元件序列位点，包括７个ＭＲＥ元件、２个ＳＴＲＥ元件、１个ＨＳＥｓ元件、７个氮因子结合位点等．这些结果 表明，不同的外源诱导物可以调节偏肿革裥菌漆酶基因的表达． 关键词：偏肿革裥菌；漆酶基因；启动子克隆；转录调控 中图分类号：Ｑ７５　　　　　　文献标志码：Ａ　　　　　文章编号：１００１４１１Ｘ（２０１３）０４０５２４０７ ＣｌｏｎｉｎｇｏｆＬａｃｃａｓｅＧｅｎｅａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＩｔｓＰｒｏｍｏｔｅｒＳｅｑｕｅｎｃｅ ｆｒｏｍＬｅｎｚｉｔｅｓｇｉｂｂｏｓａ １，２ ２ ＺＨＥＮＧＭｉａｏｍｉａｏ ，ＣＨＩＹｕｊｉｅ （１ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＦｏｒｅｓｔｒｙ，ＱｉｑｉｈａｒＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｉｑｉｈａｒ１６１００６，Ｃｈｉｎａ； ２ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ１５００４０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｃＤＮＡａｎｄＧｅｎｏｍｉｃＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅｌａｃｃａｓｅｇｅｎｅｆｒｏｍＬｅｎｚｉｔｅｓｇｉｂｂｏｓａｗｅｒｅｏｂ ｔａｉｎｅｄｂｙＰＣＲａｎｄＲＡＣＥｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ａｎｄｔｈｅｌｅｎｇｔｈｏｆｌａｃｃａｓｅｇｅｎｅｗａｓ２１６５ｂｐ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｔｈｅ ｃＤＮＡａｎｄＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｌａｃｃａｓｅｇｅｎｅｃｏｎｔａｉｎｅｄ１１ｅｘｏｎｓａｎｄ１０ｉｎｔｒｏｎｓ．ＴｈｅｃＤＮＡ ｌｅｎｇｔｈｏｆｌａｃｃａｓｅｇｅｎｅｗａｓ１８７３ｂｐ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇａｎＯＲＦｗｉｔｈ１５６３ｂｐｌｅｎｇｔｈａｎｄｃｏｄｅｓ５２０ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ． ＴｈｅｃｌｏｓｅｓｔｏｒｇａｎｉｓｍｗａｓＴｒａｍｅｔｅｓｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒｗｉｔｈ８３％ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｌｅｖｅｌｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓ．Ｔｈｅ９８６ｂｐｓｅ ｑｕｅｎｃｅｓｏｆｐｒｏｍｏｔｅｒｌｏｃａｔｅｄｉｎｔｈｅｕｐｓｔｒｅａｍｏｆｓｔａｒｔｃｏｄｅｏｆｌａ