利用SMART技术构建珙桐叶片全长cDNA文库-中南林业科技大学学报.PDFVIP

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2018-11-26 发布于天津
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利用SMART技术构建珙桐叶片全长cDNA文库-中南林业科技大学学报.PDF

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利用SMART技术构建珙桐叶片全长cDNA文库-中南林业科技大学学报

第28卷第6期中南林业科技大学学报 V01．28No．6 ofCentralSouth of Dec．2008 2008年12月 Journal UniversityForestryTechnology 文章编号：1673—923X(2008)06—0040—06 徐刚标，房学爽，叶翠层 (中南林业科技大学，湖南长沙410004) 摘要： PlantMini 以珙桐叶片为研究材料，用Rneasy Kit提取珙桐叶片组织总RNA。反转录成单链eDNA。长距离PCR方法合成双链eDNAIPCR产物经蛋白酶K消化、Sill酶切后，采用CHRoMASPIN一400柱分级分离，回收0．5kb以上的eDNA组分，以为8．3X106pfu／mI。，扩增后文库总滴度为4．16×108pfu／mL，重组率为97．3％，对随机挑取的噬菌斑进行PCR鉴定，表明插入片段大多分布在0．5～2．0 kb之间，文库质量较高．这为进一步开展珙桐EST测序分析、目的基因克隆及功能基因组学研究奠定了基础．关键词：生物技术；珙桐；叶；全长cDNA文库；SMART技术中图分类号：Q781 文献标志码：A Constructionof cDNA Full—lengthLibrary ForLeavesofDoveTreeSMART by Technique XU Gang—biao，FANG Cui—ceng Xue—shuang，YE (CentralSouth of and 410004，Hunan，China) UniversityForestryTechnology，Changsha Abstract：Theconstructionofthefirst cDNA ofDovetree(DavidiainvolucrateBail)was inthis full—lengthlibrary reportedpaper． ThetotalRNAwasisolatedfromDovetree PlantMini themRNAwas intothefirst Rneasy Kit，and converted leaves，using single— strand reverse double-strandcDNAs(ds—cDNAs)weredistance complementaryDNA，usingtranscriptase．The amplifiedbylong chain Proteinasefractionated Sill，cutby K，and CHROMASPIN一400columns． polymerasereaction(