利用TA克隆的方法简便构建入门克隆-PlantDiversity.PDFVIP

植 物 分 类 与 资 源 学 报摇 2012,34 (4):397~402 Plant Diversity and Resources摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 DOI:10.3724/ SP.J.1143.2012.11185 利用TA克隆的方法简便构建入门克隆* 1,2 1 1 1 1** 殷宪伦 , 王春涛 , 孔祥翔 , 杨永平 , 胡向阳 (1 中国科学院昆明植物研究所, 云南 昆明摇 650201;2 中国科学院研究生院, 北京摇 100049) 摘要: Gateway技术是一种通用型克隆方法, 其基于姿噬菌体位点特异性重组, 将目的DNA快速克隆到各 种与Gateway技术兼容的目的载体上, 不需要进行酶切和连接反应。 但存在获得入门克隆过程中相关反应 酶制剂价格昂贵, 且药品订购时间较长等问题。 通过对入门载体pDONR207 的改造, 使之产生3爷端具有 单个T鄄末端的线性化的入门载体, 采用TA克隆的方法替代BP反应, 从而简便、 经济和快速地获得入门 克隆。 利用改造后的Gateway技术构建拟南芥SOS2基因的原核表达载体和真核表达载体, 通过原核表达 和原生质体瞬时表达证明通过此方法构建的表达载体在原核细胞和真核细胞中都得到了很好的表达。 关键词: Gateway技术; TA克隆; 入门克隆; 原核表达; 拟南芥原生质体瞬时表达 中图分类号: Q943,Q75摇 摇 摇 摇 摇 文献标识码:A摇 摇 摇 摇 摇 摇 文章编号:2095-0845(2012)04-397-06 Simplification of Entry Vector by TA Approach 1,2 1 1 YIN Xian鄄Lun ,WANG Chun鄄Tao ,KONG Xiang鄄Xiang , 1 1** YANG Yong鄄Ping ,HU Xiang鄄Yang ( 1Kunming Institute of Botany,ChineseAcademy of Sciences,Kunming650204,China; 2 Graduate University of ChineseAcademy of Sciences,Beijing 100049,China) Abstract:Gateway technologyisauniversalcloningapproachthatenablesrapidcloningof DNAfragmentsintomul鄄 tiple Gateway鄄compatible destination vectors using姿 phage site鄄specific recombination,eliminating the requirement to workwithrestrictionenzymesandligase. Butaproblemusingthissystemformakingentry cloneistheexpensive鄄 ness and longtimetobuy the enzyme. To solvethisproblem,we createdtheTA cloning entry vector that contained a T鄄tail in each3爷鄄end through modification of pDONR207. The TA cloning approach can construct entry clones si