运用大肠杆菌来发展一套合并生物程序以同步进行纤维素水解和酒精.PDF

行 來行 精 精 類 行 年年 行 參理 理 理 理 理 理 理 理 理 理劉 理 利 精 年 年 行政院國家科學委員會補助產學合作研究計畫成果精簡報告 計畫名稱： 計畫類別：□ 先導型 █ 開發型 □ 技術及知識應用型 計畫編號：NSC 98－3114－E035－001－CC2 執行期間： 98 年 12 月 1 日至 99 年 12 月 31 日 執行單位： 逢甲大學化工系 計畫主持人： 趙雲鵬 共同主持人： 計畫參與人員： 研究摘要(500字以內)： 在所有生質能源發展的例子當中，生質酒精因可與汽油混合作為運輸用燃料，就實際 現況而言，特具有實用性和發展前瞻性。目前生質酒精的生產國以美國和巴西為首，前者 使用玉米澱粉，而後者採用的生質則來自甘蔗的蔗糖，無疑的，這些事例正足以說明工業 產量規模的酒精是可由農產衍生的生質來醱酵生產，且這個量產化的製造技術實具體可 行，不過，由於玉米澱粉和蔗糖係屬可食性的物源，當糧食面臨短缺壓力的時候，往往會 大幅牽動這些物源的價格，反導致此類替代能源不具有經濟效益，因此這類所謂的第一代 生質酒精便逐漸不受青睞。繼而代之的第二代生質酒精，則著重於來自植物木質纖維素 (lignocellulose)的生質如麥桿、甘蔗渣、稻米梗、木屑、廢紙 漿( )和棄木等，然因環境、人 文等特殊條件之迥異性，各國的經濟作物亦不盡相同，所以各國仍需根據本身的生質來源 特色來發展第二代生質酒精的生產技術。 相較於麵包酵母菌（ Saccharomyces cerevisiae ）和其他酒精生產菌株，大腸桿菌 （Escherichia coli ）具有諸多優勢包括生長快速、培養基質的需求簡單、能代謝多種單醣、 可大量生產重組蛋白質，以及運用的基因工程和醱酵技術成熟，因此發展大腸桿菌作為纖 維酒精的生產菌株深具潛力。利用生質來醱酵生產酒精之可行性關鍵技術，在於能發展一 株能符合工業生產條件需求的生產菌，主要包括(1)酒精轉化率、 (2)細胞抗酒精度、 (3)酒精 生產速率、(4)轉化多種單醣為酒精的效能和 (5)經濟的醱酵培養基質等。鑒於大腸桿菌具有 代謝多種單醣之能力、生長快速且可以簡單且經濟的培養基培養等優勢，因此本研究中， 我們進行大腸桿菌的代謝工程整建，其中包括(1)擴增現有代謝路徑；(2)移除基因表現調控 機制；(3)強化反應決定步驟的酵素活性； (4)剔除競爭的代謝途徑。實驗結果顯示，以含 葡萄糖和木糖為培養基，本研究發展的菌株可將葡萄糖和木糖同時消耗完，且轉化生成的 接近理論值的酒精量，此結果也說明本研究提出的實驗策略可有效被運用來整構菌株染色 體，以達到改變菌株之生理特性的目的。 人才培育成果說明： 本計畫的執行，完成以下幾個工作項目： (1) 建構高效能酒精生產菌株之創新技術。 (2) 選殖和表現可溶性的纖維素水解酶。