酿酒酵母胞外蛋白在衰老过程中的变化70I!Q!曼!里!璺!丛里!!里!鱼!i!12.PDF

■誓国蹬翟冒翟I型!!!!幽竺型塑!!!!!塑!!堕I 1—1802／ts．201508013 DOI：10．13995／j．cnki．1 酿酒酵母胞外蛋白在衰老过程中的变化 杜维1，朴永哲2，周彦品1，王小瑜1，赵长新1 1(大连工业大学，辽宁大连，116034)2(大连民族大学，辽宁大连，116600) 摘 要 阐述酵母细胞衰老时胞外蛋白变化。在无菌生理盐水中对酵母细胞衰老培养，测定细胞内SOD酶、 POD酶、蛋白酶酶活性变化，判断细胞衰老情况并同时提取酵母分泌蛋白，与正常培养细胞的分泌蛋白的双向电 泳作对比，并结合质谱分析。结果表明，在衰老情况下胞内抗氧化酶活性降低，细胞内蛋白酶活性升高，酵母胞 外蛋白分泌量增加。质谱分析结果表明，胞外蛋白中有部分内源蛋白碎片排出，内源蛋白碎片可能与细胞内蛋 白酶活性升高相关，胞内“垃圾”蛋白被水解成碎片排出到胞外。 关键词 酿酒酵母；胞外蛋白；时序衰老 anserine)、 分泌蛋白(secretoryprotein)是指细胞或组织分作为一种模式应用到丝状细菌(Podospora 泌的蛋白，同胞内蛋白一样在参与细胞增殖、分化以 酿酒酵母(Saccharomyces 及细胞间的信号转导等重要生命过程中发挥作 ditis elegans)、果蝇(Drosophila 用‘1。。深入了解分泌蛋白有助于弄清不同生长发育 时期、不同培养状态下的细胞状态信息，细胞异常时 象’7o。本文以酿酒酵母为载体，探究在酿酒酵母时 的病理病因以及认识整个生命过程具有重要的意 序型衰老的状态下胞外蛋白与胞内酶活性之间的关 义E2]。Zwickl等’3o提供了一种代谢标签掺入的方法 系，探讨衰老状态下胞外蛋白来源的变化情况。 研究胞外蛋白，方法对HepG细胞和人肝组织切片进 1 材料和方法 行的研究结果证实对预防和治疗肝癌其有广泛的临 床应用价值。相比于原核细胞，真核细胞具有大量结 1．1 材料 构复杂的隔性间隔，为运输与分泌带来比较大的困 1．1．1 菌种 cerevisiaeFFC 难。公认的蛋白分泌途径主要有2种”。，一种是常规 Saccharomyces 2144，大连工业大学 菌种保藏中心。 分泌途径的信号假说(signalhypothesis)；另一种为 非常规的蛋白质分泌途径，如白介素．1b、纤维原细胞 1．1．2仪器 生长因子等都是通过不依赖信号肽的非常规蛋白质 分泌途径分泌的o。目前已对蛋白质的转运与分泌 进行了广泛深入的研究，但至今对分泌途径种类未有 京博医康冷冻干燥机VFD2000；上海智城恒温摇床 一个确切的定论。 衰老是自然界生物体的普遍规律，是作为生命载 体一细胞的最终归宿。衰老过程伴随着复制生殖能力 Scientific台式四极杆一轨道阱高分辨质谱仪等。 退化，细胞代谢不可逆减缓，细胞周期停滞，细胞生理 1．I．3 药品 GeneralElectric 4— 及形态学同时也发生改变等。衰老包括复制性衰老 Company载体两性电解质pH 和时序型衰老‘6j，前者是指能复制出子代的个数，这 6．5，载体两性电解质pH3-10。过硫酸铵、丙酮、苯 种衰老与遗传物质的损伤有关；时序型衰老是指在特 酚、尿素(科密欧，优级纯)，愈创木酚，TCA，甲醇(科 定培养条件下菌体存活的时间。目前衰老