产资-卡拉胶酶菌株的筛选及其发酵条件的优化-大连海洋大学.PDFVIP

第24卷第1期 大 连 水 产 学 院 学 报 Vol.24 No.1 20 0 9 年2 月 JOURNAL OF DALIAN FISHERIES UNIVERSITY Feb . 2009 文章编号:1000-9957(2009)01-0024-06 产 资-卡拉胶酶菌株的筛选及其发酵条件的优化 李俊, 马悦欣, 冯兵, 于杨 (大连水产学院农业部海洋水产增养殖学重点开放实验室,辽宁 大连 116023) 摘要:对 资-卡拉胶酶产生菌进行富集培养, 以资-卡拉胶为唯一碳源的平板初筛, 从多种海藻上分离纯化 获得32株具有卡拉胶酶活性的菌株, 经摇瓶复筛, 从亮管藻上分离的HC4 菌株酶活力最高, 为50郾75 U/ mL。 测定了HC4菌株的16S rRNA 基因序列 1436 bp, 在核苷酸序列数据库 (NCBI) 中进行同源性检索, 发现它与Tamlana agarivorans 的相似性为98%。 通过单因子筛选和正交试验, 确定该菌株产酶的最佳培养 基组成为: 碳源资-卡拉胶5 g/ L; 氮源蛋白胨3 g/ L和NaNO 1g/ L; 无机盐NaCl20 g/ L、 K HPO ·3H O 3 2 4 2 1g/ L、 MgSO ·7H O0郾5 g/ L和CaCl 0郾1g/ L。 最佳培养条件为: 摇床转速150 r/ min, 250 mL三角瓶中 4 2 2 发酵培养基的装液量50 mL, 接种量4%, 发酵培养基起始pH7郾5, 温度28 益, 培养时间28 h。 经培养基 组成及培养条件优化后, HC4菌株的资-卡拉胶酶酶活力提高到602郾30 U/ mL, 是优化前的11郾87倍。 关键词:卡拉胶酶产生菌; 筛选; 发酵条件; 优化 中图分类号: Q939郾9摇 摇 摇 摇 文献标志码: A 摇 摇 卡拉胶是某些红藻种类的细胞壁多糖。 依据其 结构, 可将卡拉胶分为资-、 姿-、 咨-卡拉胶等。 资- 表1摇 培养基的组成 卡拉胶是由1, 3-连接的茁-D-半乳糖4-O-硫酸基 摇 摇 摇 Tab郾1摇 Components of the culture media g/ L 和1,4 连接的3,6 内醚-琢-D-半乳吡喃糖交替连 培养基 资-卡拉胶 酵母膏 NaNO3 NaCl [1] Medium 资-Carrageenan Yeast extract 接的半乳匀多糖 。 目前已从假单胞菌属Pseudo鄄 [1-3] [4-6] 富集培养基 2 2 monas 、 噬纤维菌属 Cytophaga 、 弧菌属 [7] 初筛培养基 12 2 15 Vibrio 中发现资-卡拉胶酶。 资-卡拉胶酶是一种有 用的工具酶, 能水解 资-卡拉胶的茁-1, 4 糖苷键 复筛培养基 2 2 15 产生一系列同源偶数寡糖, 可用于红藻细胞壁结构