人Dcp2基因克隆表达多克隆抗体的制备及其应用-中国科学院大学学报.PDFVIP

第 卷第 期 中国科学院研究生院学报 ２４ ３ Ｖｏｌ．２４ Ｎｏ．３ 年 月 ２００７ ５ ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＧｒａｄｕａｔｅＳｃｈｏｏｌｏｆｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ Ｍａｙ ２００７  文章编号： （ ） １００２１１７５２００７０３０３６２０６ 简 报 人Ｄｃｐ２基因克隆表达、多克隆抗体的制备及其应用 １ ２ ３ ３ １ 刘利新 刘树峰 常乃柏 刘 辉 王 嵬 （中国科学院研究生院生物系，北京 ； 中国科学院生物物理研究所 北京 ； 卫生部北京医院血液科；北京 ） １ １０００４９ ２ １００１０１ ３ １００７３０ （ 年 月 日收稿； 年 月 日收修改稿） ２００６ ９ ２５ ２００６ １１ ２１ ， ， ， ， ＬｉｕＬＸ ＬｉｕＳＦ ＣｈａｎｇＮＢ ｅｔａｌ．ＣｌｏｎｉｎｇｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｆｏｒｈｕｍａｎＤｃｐ２ｇｅｎｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ ， ， （）： ｏｆｔｈｅＧｒａｄｕａｔｅＳｃｈｏｏｌｏｆｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ２００７２４３ ３６２～３６７ 摘 要 在细胞质内的稳定性是调控基因表达的重要方式 细胞以 降解的方式 ｍＲＮＡ ． ｍＲＮＡ 对过时的、突变有害的ｍＲＮＡ进行及时清除，以保证基因的正确表达和细胞正常的生命活动． 其中脱帽酶 在 降解中起到主要作用，但对其降解 的详细作用机制了 Ｄｃｐ１?Ｄｃｐ２ ｍＲＮＡ ｍＲＮＡ 解甚少 到目前为止，尚没有该基因市售的抗体出现，阻碍了对该基因机理的研究 目的是利用 ． ． 方法，从人的胎肝文库中克隆到 基因，制备其多克隆抗体血清 实验结果显示，通过 ＰＣＲ Ｄｃｐ２ ． 溴化氰偶联柱子对该多克隆抗体血清经纯化得到的多克隆抗体，用于ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ试验，可 以检测到该蛋白内源性的表达；用于激光共聚焦定位实验显示，该内源性蛋白定位在细胞核 内；此抗体同时可用于免疫沉淀实验 因此 基因和多克隆抗体的获得，为进一步研究该基 ． Ｄｃｐ２ 因的功能创造了条件． 关键词 Ｄｃｐ２基因，多克隆抗体血清，蛋白印迹，免疫沉淀 中图分类号 Ｑ７８６ １ 引言 在细胞代谢过程中，细胞以合成及降解方式调节ｍＲＮＡ在细胞内的丰度，控制基因的正确表达，从 ［］ １ 而使细胞维持正常的生命活动 目前的研究结果说明，在真核细胞中， 的降解途径分为脱 ．