苦楝SRAPPCR反应体系的建立及优化-华南农业大学学报.PDF

　华南农业大学学报　２０１５，３６（３）：１０４１０８ ｈｔｔｐ： ｘｕｅｂａｏ．ｓｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ ∥ 　　　　　　　　　　 　ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｄｏｉ：１０．７６７１／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１４１１Ｘ．２０１５．０３．０１８　 陈丽君，刘明骞，廖柏勇，等．苦楝ＳＲＡＰＰＣＲ反应体系的建立及优化［Ｊ］．华南农业大学学报，２０１５，３６（３）：１０４１０８． 苦楝 ＳＲＡＰＰＣＲ反应体系的建立及优化 １，２ １ １ １ １ 陈丽君 ，刘明骞 ，廖柏勇 ，邓小梅 ，陈晓阳 （１广东省森林植物种质创新与利用重点实验室／华南农业大学林学院，广东广州５１０６４２； ２华南农业大学教学科研基地管理中心，广东广州５１０６４２） 摘要：【目的】应用ＳＲＡＰ技术对苦楝Ｍｅｌｉａａｚｅｄａｒａｃｈ遗传多样性、种质资源鉴定等开展研究，对苦楝ＳＲＡＰＰＣＲ体 ２＋ 系中的模板ＤＮＡ、ｄＮＴＰｓ、Ｍｇ 、引物和ＴａｑＤＮＡ聚合酶５个组分浓度进行优化，建立适合苦楝的ＳＲＡＰＰＣＲ反应 ５ 体系．【方法】采用单因素试验对反应体系中的５个因素分别设置８个浓度梯度水平，确定浓度范围后进行Ｌ１６（４） 正交试验设计，并对结果进行打分，确定优化体系．【结果和结论】ＳＲＡＰ对苦楝ＤＮＡ浓度的要求不高，有一个较宽 －１ ２＋ 的浓度适宜范围；ｄＮＴＰｓ在 ０１～０２ｍｍｏｌ·Ｌ 范围内，能扩增出条带基本相同的清晰谱带；Ｍｇ 为 ２０ －１ －１ ｍｍｏｌ·Ｌ 左右时扩增条带较清晰且数量多；引物介于０４８～０６４ ｍｏｌ·Ｌ 均能扩增出带型基本保持一致且清晰 μ 的谱带；ＴａｑＤＮＡ聚合酶在０５０～２００Ｕ范围内可以得到清晰的带型．根据正交试验设计１６个处理的得分，确定优 －１ ２＋ －１ －１ 化的反应体系为：模板ＤＮＡ３０ｎｇ、ｄＮＴＰｓ０１２５ｍｍｏｌ·Ｌ 、Ｍｇ ２２５ｍｍｏｌ·Ｌ 、引物０４８ ｍｏｌ·Ｌ 、ＴａｑＤＮＡ μ 聚合酶０７５Ｕ，反应总体积２５ Ｌ． μ 关键词：苦楝；ＳＲＡＰＰＣＲ；体系优化；正交试验设计 中图分类号：Ｓ７９２３３　　　　　　文献标志码：Ａ　　　　　文章编号：１００１４１１Ｘ（２０１５）０３０１０４０５ ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆＳＲＡＰＰＣＲｓｙｓｔｅｍｉｎＭｅｌｉａａｚｅｄａｒａｃｈ １，２ １ １ １ １ ＣＨＥＮＬｉｊｕｎ ，ＬＩＵＭｉｎｇｑ