闫宣凯_植物天然产物糖基转移酶的结构.DOCVIP

2009-2010学年植物化学课程译文 闫宣凯 译 2009-2010学年植物化学课程译文 闫宣凯 译 第 PAGE 6 页 共 NUMPAGES 7 页 第 PAGE 7 页 共 NUMPAGES 7 页 综述 FEBS Letters,2009,583:3303–3309 植物天然产物糖基转移酶的结构、机理和酶工程 Xiaoqiang Wang Plant Biology Division, Samuel Roberts Noble Foundation 2510 Sam Noble Parkway, 化学生物学专业 2009级 闫宣凯 翻译 摘 要：糖基化是一个关键进程，决定着化学物质的复杂性和植物天然产物的分布，并且影响它们的化学和生物学性质。尿苷二磷酸糖基转移酶（UGTs）是这些糖基化过程的中心酶，用糖基修饰天然产物。植物UGTs的晶体结构揭示了它们精美的空间结构并提供了它们的结构基础来了解其催化机制和底物专一性。基于结构的UGT工程可以改变底物专一性，降低或加强其催化效率，并可以赋予糖基化反应可逆性。这篇综述着重介绍了UGTs的结构观察和几个成功的糖基化工程例子。 关键词：糖基化、去糖基化、糖基转移酶、植物天然产物、酶工程 1．介绍 植物合成大量的天然产物，也就是次级代谢产物，在植物对生物和食草动物的防御中扮演重要的角色，并且对动物和人类的健康非常有好处。在天然产物的生物合成中糖基化是一个关键修饰，植物天然产物经常被糖基修饰。糖基化增加了它们的溶解性和稳定性，并且使其更容易在植物细胞内贮存和积累，此外糖基化还是决定天然产物生物活性和生物利用度的主要因素之一。例如黄酮类物质是一个多样化的植物天然产物家族，有超过7000种已知化合物，它们经常易糖基化修饰后的形式存在。槲皮素作为一种有效的抗氧化剂，可以被多种糖基在不同位点进行修饰，形成300种不同的槲皮苷类物质，有着不同的潜在生物活性。在柑橘黄素7-O-葡糖苷的葡萄糖基的2-OH或6-OH结合上一个鼠李糖，决定了葡萄柚的苦味或柑橘的怪味。萜类化合物代表着另一大类的天然产物，已鉴别出超过40000中不同的化合物。皂苷类是萜烯苷类物质，具有抗真菌活性，但去除其糖基常常引起其生物活性的丧失。甜叶菊叶中的二萜苷类化合物甜菊苷和甜菊双糖A苷是高强度的甜味化合物，它们不同的糖基化形式决定了它们的尝起来不同的味道。 天然产物的糖基化被尿苷二磷酸（UDP）糖基转移酶（UGTs）催化，糖基转移酶（GTs）家族1中的成员。GTs是一个包括超过90种家族在内的一个大的酶家族。UGTs专一性利用UDP-糖基作为糖基来源，转移多种糖基到植物天然产物上。与它们的多样性与复杂性一致，大量UGT的基因亚家族已为植物天然产物的糖基化而进化，例如，107种UGT基因已在拟南芥基因组中被鉴别出来，拟南芥UGT73C6和UGT78D1都参与了生物体内黄酮醇的糖基化，而基因敲除突变体的代谢简图显示叶和花组织内没有槲皮苷和山奈酚苷的积累；UGT74F2进行临氨苯甲酸和水杨酸的糖基化修饰，UGT75C1是一个功能性花青素5-O-葡糖基转移酶。在蒺藜苜蓿中，UGT71G1参与皂苷类物质的生物合成，并且完整的转录和代谢简图显示茉莉酸甲酯处理可以诱导细胞培养物中UGT71G1的表达和三萜烯苷的积累。苜蓿UGT72L1参与了种皮中表儿茶素3’-O-葡糖苷的生成，这是原花青素生物合成中的一个关键步骤。 此外，植物UGTs还在清除外源性有害物质、调节活性和植物激素中扮演重要角色。例如，拟南芥UGT73C5糖基化甾类激素油菜素内酯并减少它们的生物活性，拟南芥UGT72B1参与外源物质代谢等，代谢污染物质2,4,5-三氯苯酚和3,4-二氯苯胺。 植物UGTs由于其在糖基化中的关键作用和植物中的生理功能以及潜在的生物技术应用价值而吸引了众多的研究兴趣。近年来，植物UGTs的结构研究已取得重大进步，使我们能更好的了解UGT接到的糖基化作用机制并把UGT酶工程从改变糖基化形式引导到生产生物活性苷类物质。 2. UGTs的结构观察和糖基化作用机理 五种植物UGTs的晶体结构已经报道，包括M. truncatulaUGT71G1、UGT85H2和UGT78G1，葡萄VvGT1，和拟南芥UGT72B1。这些植物UGTs的晶体结构都有GT-B折叠，在GT酶大家族中一半的折叠是保守的，由两个N-和C-末端Rossmann折叠结构域组成，每个结构域都包含α中心的β片层，两侧都是α螺旋。UGT酶的N-和C-末端结构域形成一个裂缝，这就是底物结合位点，核苷酸糖基供体结合在这个裂缝上，主要与酶的C-末端结构域反应