甘蔗独脚金内酯生物合成基因ScCCD8的克隆与表达-中国农业科学.PDFVIP

中国农业科学 2016,49(14):2662-2674 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.14.002 甘蔗独脚金内酯生物合成基因 ScCCD8 的克隆与表达分析 吴转娣，刘新龙，刘家勇，昝逢刚，赵培方，林秀琴，陈学宽，苏火生，刘洪博，吴才文 （云南省农业科学院甘蔗研究所/云南省甘蔗遗传改良重点实验室，云南开远 661699 ） 摘要：【目的】克隆甘蔗的ScCCD8，分析其序列特征并预测其功能，研究在甘蔗不同组织部位、不同胁迫处 理条件以及不同生长时间点 ScCCD8 的表达情况，为该基因在甘蔗基因工程育种中的应用提供理论支撑。【方法】 以NCBI中检索的甘蔗CCD8 同源片段EST序列为模板设计引物，扩增甘蔗CCD8 的片段，采用RACE和 RT-PCR技术 分别从甘蔗品种新台糖22号中克隆 CCD8 的 5′、3′目的片段和全长cDNA序列，以生物信息学方法对序列进行预测 分析，利用 qRT-PCR 方法分析 CCD8 在不同组织、不同逆境胁迫条件下和不同生长时间点的表达特性。【结果】克 隆获得甘蔗 CCD8，命名为 ScCCD8，GenBank 登录号为 KP742973.1。该 cDNA 全长 2 016 bp，含有 1 个 1 623 bp 的完整开放阅读框（ORF），编码 540 个氨基酸，编码的蛋白质分子量为 59.534 kD。生物信息学分析表明 ScCCD8 编码的蛋白是定位于叶绿体上的非分泌性蛋白，不是典型的跨膜蛋白，没有信号肽位点。存在着多个糖基化位点 和磷酸化位点等活性位点。序列分析表明，ScCCD8 与其他植物的 CCD8 蛋白有很高的相似性。系统进化树分析显 示，甘蔗ScCCD8与高粱的CCD8蛋白亲缘关系较近。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析表明，ScCCD8 的表达具有 组织特异性，在根中的表达量最高，是老叶中表达量的18倍。其在模拟重度干旱胁迫（20% PEG）、盐胁迫（200 mmol·L-1 NaCl）、磷缺乏（1/8 mmol·L-1 ）和营养缺乏(纯水培养)4 种胁迫处理下，茎尖中的ScCCD8 均被诱导表达，且在处 理24 h以后，ScCCD8 的表达量增加较为明显。在不同生长时期，ScCCD8 在甘蔗不同生长时期的茎尖中均有表达， 且在幼苗期的表达量高于萌芽期和分蘖期。【结论】从甘蔗品种ROC22中克隆获得的甘蔗独脚金内酯生物合成关键 基因 ScCCD8 是 CCD8基因家族成员，推测 ScCCD8 可能与甘蔗SLs响应逆境胁迫有关。 关键词：甘蔗；ScCCD8；独脚金内酯；实时荧光定量PCR；干旱胁迫 Cloning and Expression Analysis of Strigolactones Biosynthesis- Related Gene ScCCD8 in Sugarcane WU Zhuan-di, LIU Xin-long, LIU Jia-yong, ZAN Feng-gang, ZHAO Pei-fang, LIN Xiu-qin, CHEN Xue-kuan, SU Huo-sheng, LIU Hong-bo, WU Cai-wen (Sugarcane Research Institute, Yunnan Academy of Agricultural Sciences/Yunnan Key Laboratory of Sugarcane Genetic Improvement, Kaiyuan 661699, Yunnan) Abstract: 【Objective 】The gene of Carotenoid Cleavage Dioxygenase8 (CCD8) from sugarcane (Saccharum officinarum L.) was cloned, then the sequence signature