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甘蔗独脚金内酯生物合成基因ScCCD8的克隆与表达-中国农业科学
中国农业科学 2016,49(14):2662-2674
Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.14.002
甘蔗独脚金内酯生物合成基因 ScCCD8 的克隆与表达分析
吴转娣,刘新龙,刘家勇,昝逢刚,赵培方,林秀琴,陈学宽,苏火生,刘洪博,吴才文
(云南省农业科学院甘蔗研究所/云南省甘蔗遗传改良重点实验室,云南开远 661699 )
摘要:【目的】克隆甘蔗的ScCCD8,分析其序列特征并预测其功能,研究在甘蔗不同组织部位、不同胁迫处
理条件以及不同生长时间点 ScCCD8 的表达情况,为该基因在甘蔗基因工程育种中的应用提供理论支撑。【方法】
以NCBI中检索的甘蔗CCD8 同源片段EST序列为模板设计引物,扩增甘蔗CCD8 的片段,采用RACE和 RT-PCR技术
分别从甘蔗品种新台糖22号中克隆 CCD8 的 5′、3′目的片段和全长cDNA序列,以生物信息学方法对序列进行预测
分析,利用 qRT-PCR 方法分析 CCD8 在不同组织、不同逆境胁迫条件下和不同生长时间点的表达特性。【结果】克
隆获得甘蔗 CCD8,命名为 ScCCD8,GenBank 登录号为 KP742973.1。该 cDNA 全长 2 016 bp,含有 1 个 1 623 bp
的完整开放阅读框(ORF),编码 540 个氨基酸,编码的蛋白质分子量为 59.534 kD。生物信息学分析表明 ScCCD8
编码的蛋白是定位于叶绿体上的非分泌性蛋白,不是典型的跨膜蛋白,没有信号肽位点。存在着多个糖基化位点
和磷酸化位点等活性位点。序列分析表明,ScCCD8 与其他植物的 CCD8 蛋白有很高的相似性。系统进化树分析显
示,甘蔗ScCCD8与高粱的CCD8蛋白亲缘关系较近。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析表明,ScCCD8 的表达具有
组织特异性,在根中的表达量最高,是老叶中表达量的18倍。其在模拟重度干旱胁迫(20% PEG)、盐胁迫(200 mmol·L-1
NaCl)、磷缺乏(1/8 mmol·L-1 )和营养缺乏(纯水培养)4 种胁迫处理下,茎尖中的ScCCD8 均被诱导表达,且在处
理24 h以后,ScCCD8 的表达量增加较为明显。在不同生长时期,ScCCD8 在甘蔗不同生长时期的茎尖中均有表达,
且在幼苗期的表达量高于萌芽期和分蘖期。【结论】从甘蔗品种ROC22中克隆获得的甘蔗独脚金内酯生物合成关键
基因 ScCCD8 是 CCD8基因家族成员,推测 ScCCD8 可能与甘蔗SLs响应逆境胁迫有关。
关键词:甘蔗;ScCCD8;独脚金内酯;实时荧光定量PCR;干旱胁迫
Cloning and Expression Analysis of Strigolactones Biosynthesis-
Related Gene ScCCD8 in Sugarcane
WU Zhuan-di, LIU Xin-long, LIU Jia-yong, ZAN Feng-gang, ZHAO Pei-fang, LIN Xiu-qin, CHEN Xue-kuan,
SU Huo-sheng, LIU Hong-bo, WU Cai-wen
(Sugarcane Research Institute, Yunnan Academy of Agricultural Sciences/Yunnan Key Laboratory of Sugarcane Genetic
Improvement, Kaiyuan 661699, Yunnan)
Abstract: 【Objective 】The gene of Carotenoid Cleavage Dioxygenase8 (CCD8) from sugarcane (Saccharum officinarum L.)
was cloned, then the sequence signature
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