动物细胞工程试验指导-生物学试验教学中心.DOCVIP

PAGE PAGE 1 细胞工程实验指导 (本科生用) 陈 宏 房兴堂 编著 江苏师范大学 二○一三年九月 PAGE PAGE ii 目 录 第一部分 实验室规章制度……………………………………………1 学生实验守则……………………………………………………………1 实验室安全管理制度……………………………………………………1 第二部分 细胞工程基本实验室技术………………………………3 一、清洗与包装…………………………………………………………3 二、消毒灭菌……………………………………………………………5 三、无菌操作……………………………………………………………9 四、实验室维持…………………………………………………………10 第三部分 实验项目……………………………………………………12 实验一、 动物细胞工程常用培养液配制与检测……………………12 实验二、 小鼠睾丸、附睾及输精管精子采集、运动能力检测 与结构观察…………………………………………………17 实验三、 小鼠输卵管卵母细胞采集与结构观察……………………20 实验四、小鼠超数排卵及附植前不同发育阶段胚胎采集与结构观察 ……………………………………………………………25 实验五、 小鼠组织细胞原代培养……………………………………29 实验六、 小鼠组织细胞传代培养……………………………………32 实验七 小鼠胎儿成纤维细胞活性检测……………………………34 实验八、 体外培养细胞生长曲线测定………………………………36 实验九、 小鼠卵母细胞体外受精……………………………………39 实验十 小鼠胚胎体外培养…………………………………………41 实验十一 植物培养基的配制………………………………………43 实验十二 植物材料的初代培养……………………………………48 实验十三 花粉发育时期的鉴定……………………………………51 实验十四 植物离体培养物的形态观察……………………………54 实验十五 植物茎尖生长点、胚胎及花器官的剥离与观察………56 实验十六 植物离体根与植物细胞的液体培养……………………60 实验十七 植物离体培养物的继代培养与生根培养………………64 实验十八 植物原生质体的分离、纯化与培养………………………67 实验十九 植物花药的离体培养……………………………………70 第四部分 部分实验项目流程简图…………………………………72 常用培养液配制与检测………………………………………………72 小鼠精子采集与结构观察……………………………………………73 小鼠超数排卵、卵母细胞及附植前胚胎结构观察……………………74 小鼠体外受精与胚胎体外培养………………………………………75 小鼠胎儿成纤维细胞原代培养、传代培养……………………………76 细胞活性检测、生长曲线测定………………………………………76 第五部分 附录：实验小鼠的特性及饲养管理…………………77 一、小鼠的生物学特性………………………………………………77 二、小鼠的习性…………………………………………………………78 三、小鼠生殖系统解剖…………………………………………………78 四、小鼠的生殖生理学特点……………………………………………80 五、小鼠的饲养管理……………………………………………………83 PAGE PAGE 1 第一部分 实验室规章制度 学生实验守则 一、实验前必须预习实验教材，明确实验原理、目的、要求、方法及步骤，熟悉所用仪器设备的性能及操作规程，作好实验准备。 二、进入实验室，要严格遵守实验室各项规章制度，衣着及所携带物品符合实验要求，按规定位置就位。 三、保持室内安静、整洁，不随地吐痰，不乱扔纸屑、乱倒废物及实验产生的废料，不高声喧哗，严肃自律，不影响他人实验。 四、实验时要遵从老师指导，遵守操作规程，认真操作，仔细观察，积极思考，努力培养自己分析问题和解决问题的能力。 五、如实记录实验数据，分析实验现象，不抄袭他人实验记录，做完实验认真复查，如有错漏，及时更正或补做。 六、要爱护仪器设备，节约水、电、试剂、药品和器材。凡损坏或丢失仪器、材料、工具等，均应及时报告并登记，按规定处理。 七、实验结束要整理实验台面，收拾实验仪器、器材，打扫卫生。离开实验室时，要注意切断电源、水源、气源，经许可方可离开。 八、按时完成实验报告，认真做好实验后的复习和总结，真正掌握所学知识。 实验室安全管理制度 一、实验室对所有实验人员及学生进行安全教育，牢固树立安全意识。根据本室设备、环境及实验特点，制定防火、防爆、防盗、防事故等方面安全管理措施，严格执行。 二、仪器室、重点要害部位及使用、存放易