人源SIRT4蛋白在毕赤酵母中的表达及纯化-郑州大学学报医学版.PDFVIP

doi:10.13705/ j.issn.1671-6825.2017.11.130 人源SIRT4 蛋白在毕赤酵母中的表达及纯化 1,2,3) 1,2,3) 1,2,3) 1,2,3) 1,2,3) 1,2,3) 4) 1,2,3,5) 朱　 红 ,王　 春 ,王　 芳 ,邹叶芳 ,陈晓雪 ,刘　 亭 ,李　 燕 ,何　 彬 1)贵州医科大学药学院贵阳550004　 2)贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室 贵阳550004　 3)贵州医科大学民族药与 中药开发应用教育部工程研究中心 贵阳550004　 4)贵州医科大学基础医学院化学教研室 贵阳550004　 5)贵州医科大学药 用植物功效与利用国家重点实验室 贵阳550004 关键词　 人源SIRT4蛋白;巴斯德毕赤酵母;胞内表达 中图分类号　 R915 摘要　 目的:获得表达量较高且有活性的人源SIRT4 蛋白。 方法:将 SIRT4 基因克隆到pPICZA 载体上,得 到重组pPICZA-SIRT4 表达质粒。 重组质粒线性化后转入到巴斯德毕赤酵母 X33感受态细胞中,筛选出阳性菌 TM 株。 将阳性重组菌株发酵培养,并对诱导剂甲醇浓度进行优化,表达蛋白用镍柱 HisTrap HP进行纯化,并对表 达的蛋白进行活性考察。 结果:SDS显示表达的SIRT4 目的蛋白大小约33 000,与预期蛋白相对分子质量 大小相符,进一步利用His标签抗体通过Western blot确认了目标蛋白,并且初步验证了SIRT4 的去生物素酰化 和去硫辛酰化的活性。 结论:成功用巴斯德毕赤酵母表达了有活性的SIRT4 蛋白,并且获得酵母表达的最佳诱 导条件。 【基金项目】国家自然科学基金资助项目;贵州省教育厅资助项目(2015-57,2015-371,2015-338);贵州省科技厅资助项目(2015-735 0,2016-5613\5677) 【作者简介】何彬,通信作者,男,1978年7月生,博士,教授,研究方向:靶向药物研究与开发,E-mail:binhe@gmc.edu.cn ·444 · 郑州大学学报(医学版)　 2018年7月　 第53卷　 第4期 Expression and purification of human SIRT4 protein in Pichia pastoris ZHU Hong1,2,3) , WANG Chun1,2,3) , WANG Fang1,2,3) , ZOU Yefang1,2,3) ,CHEN Xiaoxue1,2,3) , LIU 1,2,3) 4) 1,2,3,5) Ting ,LI Yan ,HE Bin 1)College of Pharmacy,GuizhouMedical University,Guiyang 550004　 2)Guizhou Provincial Key Labo- ratory of Pharmaceutics,GuizhouMedical University,Guiyang550004　 3)Engineering Research Centerfor theDevelopmentandApplicationof EthnicMedicineand TCM(Ministry of Education),GuizhouMedical U- niversity,Guiyang 550004　 4)Department of Chemistry,College of BasicMedicalSciences,GuizhouMedi- cal University,Guiyang 550004　 5)State Key Laboratory of Medicinal Plant Efficacy and Utilization, GuizhouMedical University,Guiyang 550004 Keyw