一种高转染效率的树枝状化聚轮烷的研究.DOCVIP

· PAGE 2· 稀有金属材料与工程 第40卷 第6期 稀有金属材料与工程杂志社等：《稀有金属材料与工程》写作及排版规范 ·171· 第40卷 第3期 稀有金属材料与工程 Vol.40, No.3 2011年 3月 RARE METAL MATERIALS AND ENGINEERING March 2011 _______________________________ 收到初稿日期： ；收到修改稿日期： 基金项目：国家自然科学基金资助（项目 作者简介：黄欢，女，1988年生，硕士，中山大学附属第一医院，广东 广州510080，电话：020E-mail:huanh1988@ 一种高转染效率的树枝状化聚轮烷的研究 黄欢1，2，曹端文3，秦凌浩3，潘仕荣1，冯敏2 (1中山大学附属第一医院，广东 广州 510080) (2中山大学药学院，广东 广州 510006) (3南方医科大学，广东 广州 510505) 摘 要:以环糊精为主体的聚轮烷利用环糊精上羟基的反应性可以进行多种修饰而用于生命科学的应用。本研究用低毒性的PAMAM G1对聚轮烷进行修饰，获得了一种新的阳离子聚合物。对阳离子聚合物进行表征和性能测定，发现这是一种高转染率，低毒性的非病毒载体，非常利于基因传递。 关键词: 聚轮烷；树枝状化；非病毒载体 中图法分类号：TG? ? ? 文献标识码： A 文章编号：1002-185X(2011)0?-0???-0? 树枝状聚合物是通过树枝化基元逐步反应制得的高度枝化、具有树枝状三维空间结构的单分散大分子。这类大分子表面堆彻致密，内部有空隙，因此可以用于药物的基因的传递；其分子尺度在纳米级，几何对称，分子形状和大小可以在合成时进行控制，有利于细胞的摄取。在树枝状聚合物中，聚酰胺-胺树枝状大分子（PAMAM）是一类应用非常广泛的大分子。PAMAM是一乙二胺为核，通过丙烯酸甲酯和乙二胺交替加成和酰胺化反应制成，每交替反应一次，升级一代。PAMAM表面有大量的伯氨基，因此带有大量的正电荷，可以与带负点的DNA通过静电吸引相互作用，包裹DNA并传递到细胞内。这种基因传递的能力随着PAMAM代数的增加而增加，但是，其细胞毒性也随之增加。因此，对PAMAM分子进行修饰将其改造成更有利于基因转染的阳离子载体是目前的研究热点之一。 其中一种修饰的方法是树枝状化修饰。树枝状化修饰通常指在一个有可修饰基团的线性聚合物的多个可修饰基团上都接上树枝状聚合物进行修饰。这种方法设计出来的新聚合物的性能往往大于各自组分性能的总和，具有协同效应，并能展现出新的特殊性质。 本研究选择的用于树枝状化修饰的线性分子是聚轮烷。聚轮烷（polyrotaxane）是一种多个环状分子（主分子）穿于线性轴分子（客分子）中并在轴的两端接上大体积的封端基团以防环状分子脱落的一种聚合物【1】。利用不同的主分子和客分子以及封端基团可以合成不同的聚轮烷。目前在生命科学上应用较多的主分子是环糊精。环糊精的生物相容性很好，而且含有多个可以用于修饰的羟基，非常有利于作为树枝状化的改造。根据报道【2】，PEG就可以与多个α-环糊精自发形成包合物，用金刚烷胺进行封端，可以得到聚轮烷。该种方法合成的聚轮烷所用材料便宜低毒，且合成较为简单，但是产品水溶性很差，难以进行生物应用，利用聚轮烷中环糊精的羟基的反应活性，用低毒性的PAMAM G1对聚轮烷进行树枝状化修饰得到了一种水溶性良好的新的阳离子聚合物，可以用于基因转染。 1 材料与方法 1.1试剂与材料：α-环糊精购于山东智源生物，PEG2000购于天津大茂化学试剂厂，CDI、TEMPO、BOP、EDIPA购于阿拉丁,NaBr、NaClO购于广州化学试剂厂，盐酸金刚烷胺购于西亚试剂公司，PAMAM G1由本实验室合成，绿色荧光蛋白基因质粒（pEGFP-C1）由华西医科大学微生物实验室提供，Hek293A细胞购于Invitrogen公司； 1.2聚合物的合成：如图1所示，聚轮烷的合成是根据之前的文献报道经过一定的修改来合成的。 首先在pH值为10~11的NaBr和NaClO的水溶液中用TEMPO