番茄防御酶活性和番茄抗白粉病相关性研究.docVIP

番茄防御酶活性和番茄抗白粉病相关性研究 　　摘 要：植物在病害或者环境胁迫条件下会产生酶促性的保卫性生化反应，酶活性测定表明：未接种番茄幼苗中，各品种PAL活性无明显变化，接种白粉菌后抗病品种和感病品种的PAL活性均有升高；未接种番茄幼苗中各品种间酶活性无明显变化，接种白粉菌后抗病品种的POD活性迅速升高，表现出对病菌侵染强烈的应激变化，而感病品种升高缓慢；未接种番茄幼苗叶片中，各品种间酶活性无显著差异，且都变化趋势不明显；接种白粉菌后抗病品种的PPO活性迅速升高，表现出对病菌侵染强烈的应激变化，而感病品种升高趋势相对缓慢。 　　关键词：番茄白粉病；番茄防御酶；抗病性；相关性 　　一、材料和方法 　　1.材料 　　（1）白粉菌来源。2012年10月份，采自湖北省荆州市长江大学西校区日光温室番茄白粉菌带回室内，接种健康感病番茄品种里格尔87-5植株上扩大繁殖，备用。 　　（2） 供试品种。根据2007年对64个加工番茄品种对白粉病抗性的田间调查结果，挑选高抗品种钻石、TOM0629D，耐病品种Z00-73、3379，感病品种里格尔87-5和高感品种3144等6个品种，种子均由甘肃省高台中化番茄制品公司提供。 　　2. 方法 　　（1） 番茄幼苗的培养和接种方法。选用无病种子，种植在装有灭菌土的塑料营养钵中，每品种种50钵，每钵6粒。放在温室或培养室培养，于4～6叶期将发病叶片上的分生孢子扫落或抖落到健康植株叶片上，并保湿48h，每品种接种35钵（其中15钵用于测定酶活性，20钵用于调查统计发病率和病情指数），15钵喷清水作对照，并隔离培养。分别在接种前、接种后0.5d、1d、2d、4d、7d和10d检测各品种处理和对照的酶活性，并于病害特征明显后（高感品种发病率达到50%时），调查统计各品种发病率和病情指数。 　　（2）酶液提取及活性测定 　　① POD和PPO活性检测方法。实验所需化学试剂：0. 05mol/l磷酸缓冲液（PH为5.5）； 0.05mo1/1愈创木酚溶液；2%的双氧水溶液；0. lmol/1的儿茶酚溶液；20%三氯乙酸溶液。实验仪器用：精密数显恒温水浴锅；精密酸度计；分光光度计。 　　实验步骤：（1）粗酶液的制备，煎取5g叶片，剪碎后放入早置于冰浴中预冷过的研钵中，加入适量的磷酸缓冲液后研磨成匀浆，将匀浆完全转入离心管中后在3000r/min转速下离心l0min，上清液转入25m1容量瓶中，定容后在低温下保存备用。（ 2 ） POD活性的测定，取3支试管，依次加入2. 9m10. 05mo1/1的磷酸缓冲液；1.0m12%的H2O2；1m10.05mo1/1的愈创木酚溶液，将其中一支试管在沸水中煮5min为对照。作两组重复实验，检测体系在加入酶液后立即于37℃水浴中保温1 Smin，然后迅速转入冰浴中，立即加入2.0m120%三氯乙酸溶液终止反应，然后将反应混合溶液在5000r/min转速下离心10min，适当稀释后在分光光度计上470nm波长下检测吸光值。（ 3 ） PPO活性检测与POD基本相似，只是反应体系为3.9m1磷酸缓冲液；1 ml儿茶酚和0.1 ml酶液，水浴中的反应时间为10min，在525nm波长下检测吸光值。 　　酶活力计算：以每分钟在该波长下变化0.01为1个酶活力单位，计算公式如下：酶活力（U）=△A×D/0.01×wt单位为：U/gfw 　　②PAL活性测定。取供试番茄叶片1 g，加PVP 0.1 g，5 mM巯基乙醇硼酸缓冲液4 mL和少量石英砂于研钵中研磨成匀浆，4℃下8000 r/min离心15 min，取上清液0.1 mL，加底物0. 02 M苯丙氨酸硼酸缓冲液（pH8.8）3 mL，蒸馏水2.9 mL，30℃保温30 min，对照以蒸馏水代底物，290 nm比色，以每min在290 nm处吸收变化0.01所需酶量为一单位（相当于每毫升反应液中形成1μg肉桂酸）。 　　二、结果与分析 　　1.供试品种间PAL（苯丙氨酸解氨酶）活性与白粉病抗性的关系 　　（1） PAL活性的在品种间的动态变化。PAL活性测定结果表明， 未接种番茄幼苗中，各品种PAL活性无明显变化，接种白粉菌后抗病品种和感病品种的PAL活性均有升高，并且均出现两个峰值，第一个峰值出现在0.5d～1d，此峰幅度均小，最高为134.70U/g?h FW（高抗品种TOMO629D，0.5d），比其对照平均值升高24.3%；第二峰均在第7d，此峰幅度较大，高抗品种TOMO629D酶活性最高（186.40 U/g?h FW），比其对照均值升高72.1%。接种第10d呈下降趋势，除两个高抗品种外，其余品种PAL活性均接近对照。 　　（2） PAL活性与供试品种抗病性的关系。将各品种对照10