水母雪莲查尔酮合酶基因的克隆表达及酶活分析.PDF

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2011, September 25; 27(9): 1363−1370 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ ©2011 CJB, All rights reserved. 农业生物技术 水母雪莲查尔酮合酶基因的克隆、表达及酶活分析 1,2 1 1 1,2 3 1 夏芳 ，李厚华 ，付春祥 ，虞珍珍 ，徐彦军 ，赵德修 1 中国科学院植物研究所，北京 100093 2 中国科学院研究生院，北京 100049 3 中国农业大学理学院，北京 100193 摘 要: 从水母雪莲 Saussurea medusa Maxim. cDNA 文库中得到一段查尔酮合酶基因 (SmCHS) 片段，然后通过 RT-PCR 得到完整的查尔酮合酶基因cDNA 。序列分析表明SmCHS 全长 1 313 bp，其开放阅读框为1 170 bp，编码389 个氨基酸，预测表达蛋白的分子量为43 kDa 。构建原核表达质粒pET28a(+)-SmCHS ，重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3) ， 获得表达菌株。经 IPTG 诱导表达后，对表达产物进行 SDS分析，结果显示，表达的融合蛋白以部分可溶的形 式存在。用Ni-NTA 预装柱对融合蛋白进行亲和纯化，对纯化蛋白进行酶活检测，结果表明融合蛋白具有查尔酮合酶活 性，可催化底物4-香豆酰辅酶A 和丙二酰辅酶A 缩合生成产物柚皮素查尔酮。 关键词: 水母雪莲，查尔酮合酶，原核表达，纯化，酶活检测 Cloning, expression and charaterization of chalcone synthase from Saussurea medusa 1,2 1 1 1,2 3 1 Fang Xia , Houhua Li , Chunxiang Fu , Zhenzhen Yu , Yanjun Xu , and Dexiu Zhao 1 Institute of Botany , Chinese Academy of Sciences, Beijing 100093, China 2 Graduate University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China 3 College of Science, China Agricultural University, Beijing 100193, China Abstract: A fragment of chalcone synthase gene (SmCHS) was cloned from the cDNA library constructed in Saussurea medusa. The full-length cDNA sequence of SmCHS was obtained by RT-PCR. Sequence analysis showed that the full length of SmCHS was 1 313 bp, containing an open reading frame (1 170 bp) encoding 389 amino acids. The mo