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精子体外处理方法和技巧 　　【摘要】 目的：探讨精液体外处理方法及技巧。方法：2010年取卵周期数为1402例实施部分上游法及部分密度梯度离心法；2011年取卵周期数为1667例实施大部分梯度密度离心法+上游法及少部分上游法；2012年取卵周期数为1321例实施全部梯度密度离心+上游法。观察并记录各年份患者受精情况，进行统计学分析，得出结论。结果：本院自2010年-2012年，临床妊娠成功率呈现出逐年上升趋势，结果比较差异具有统计学意义（P0.05）。结论：应用密度梯度离心+上游序贯法可使精子的运动参数及形态学均得到明显改善，增加患者妊娠率及保障精子核DNA链完整性，是较好的体外处理精液方法，值得临床推广应用。 　　【关键词】 精液； 体外处理； 影响结果分析 　　本文将对本院2010年1月1日-2012年9月30日近三年来进行体外受精-胚胎移植治疗的夫妇进行临床研究，从而探讨精液体外处理方法及技巧，为临床提高体外受精-胚胎移植治疗不孕不育症患者疗效以及优质胚胎率提供可靠依据，现报告结果如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 本文将对本院2010年1月1日-2012年9月30日近三年来进行体外受精-胚胎移植治疗的夫妇进行临床研究，其中2010年1402例，男平均（31.4±0.5）岁，女平均（29.7±0.8）岁，不孕不育症平均病程（5.6±0.5）年；2011年1667例，男平均（31.9±0.5）岁，女平均（30.3±0.7）岁，不孕不育症平均病程（5.1±0.8）年；2012年1321例，男平均（32.1±0.6）岁，女平均（30.5±0.8）岁，不孕不育症平均病程（5.2±0.6）年。2010年IVF-ET取卵周期数为1402例、2011年1667例、2012年（1-9月）1321例。 　　1.2 方法 对2010年1月1日-2012年9月30日近三年来进行体外受精-胚胎移植治疗的夫妇临床资料进行回顾性分析，2010年取卵周期数为1402例实施部分上游法及部分密度梯度离心法对精液进行处理；2011年取卵周期数为1667例实施大部分梯度密度离心法+上游法以及少部分上游法对精液进行处理；2012年取卵周期数为1321例实施全部梯度密度离心+上游法对精液进行处理。观察并记录各年份患者受精情况，进行统计学分析，得出结论。 　　1.2.1 采样处理 女方给予常规促排卵方案，于体内卵泡发育成熟后对其肌肉注射人绒毛膜促性腺激素（即hCG）[1]，剂量为5000或10 000 IU，32～36 h后，经阴道超声引导下对女方进行穿刺取卵[2]。男方于女方取卵当日通过手淫法取精液[3]，取精液前男方禁欲3～7 d[4]，将精液收集在无菌塑料杯中液化后待用。 　　1.2.2 上游法[5] 取将液化后的精液，加入2～3 ml Vitorlife公司生产的HTF洗涤液进行混合，之后以每分钟2000转速度离心3～5 min，弃上清液后加入试管底部并在上层加入2 ml培养液，经浓度为5%、37℃二氧化碳培养箱中上游30～40 min，之后取上清液离心3～5 min，弃上清液后待用。 　　1.2.3 密度梯度离心+上游序贯法[6] 对精液进行处理，选用Vitorlife公司生产的Isolate梯度分离液，在15 ml圆锥离心管首先将浓度为90%、剂量为1 ml的Isolate分离液注入，之后在其上方加入浓度为45%、剂量为1 ml的Isolate分离液，最上层也轻轻缓慢加入液化的精液，离心速度为每分钟2000转离心10 min弃上清，用剂量为2 ml的HTF洗涤液把上述所得沉淀物轻轻混匀，离心速度为每分钟2000转离心3～5 min弃上清，下悬液加入试管底部，在上面加入2 ml培养液，于浓度为5%、37 ℃二氧化碳培养箱中上游30～40 min将其吸出，每分钟2000转速度离心3～5 min，弃上清后待用。 　　1.2.4 受精措施 患者取卵完成后，对其进行黄体酮肌肉注射以便支持黄体[7]，于胚胎移植完成2周后进行尿液试验，结果为人绒毛膜促性腺激素呈阳性，于4周后对患者进行B超临床医学影像观察，若患者体内出现妊娠囊及胎心搏动，则可确诊为临床妊娠[8]。 　　1.3 统计学处理 采用SPSS 13.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验；计数资料采用 字2检验，以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　体外受精-胚胎移植治疗结果分析，见表1。由表1可知，本院自2010年-2012年，临床妊娠成功率呈现出逐年上升趋势，结果比较差异具有统计学意义（P0.05）。 　　3 讨论 　　目前临床上常借助辅助生殖技术对不孕不育症患者进行治疗，常规治疗方法为体外受精-胚胎移植（简称I