白细胞介素17和血管内皮细胞生长因子在人冠状动脉粥样斑块表达及稳定性研究.docVIP

白细胞介素17和血管内皮细胞生长因子在人冠状动脉粥样斑块表达及稳定性研究 　　[摘 要] 目的 研究白细胞介素-17(IL-17)及血管内皮细胞生长因子(VEGF)在人冠状动脉粥样斑块的表达及与斑块稳定性的关系。 　　方法 从36 例尸检标本中获得48 个冠状动脉蜡块标本,其中急性心肌梗死15 例,非急性心肌梗死的粥样硬化冠状动脉21例,由组织病理学分为稳定型(21个) 和不稳定型(27个) 斑块。采用免疫组织化学的方法测定巨噬细胞(CD68)、平滑肌细胞(α-actin) 、IL-17及VEGF在冠状动脉局部组织中的表达情况。 　　结果IL-17和VEGF在血管内膜及中膜均有表达,IL-17在巨噬细胞及泡沫细胞处表达最明显,IL-17阳性细胞见于斑块处的巨噬细胞、泡沫细胞、内皮细胞、平滑肌细胞及中膜平滑肌细胞胞浆。VEGF和IL-17在不稳定型斑块内膜及中膜的表达均明显强于稳定型斑块(?P 0.05)。在不稳定型斑块处内膜IL-17与VEGF的表达强度呈正相关(r= 0.684,P0.001)。 　　结论IL-17 及VEGF在冠状动脉粥样斑块局部有表达,在不稳定型斑块的表达明显高于稳定型斑块,与斑块的稳定性密切相关。IL-17在粥样斑块的表达与VEGF呈正相关。 　　[关键词] 冠状动脉粥样斑块;白细胞介素-17;血管内皮细胞生长因子? 　　[中图分类号] R543.3[文献标识码] A[文章编号] 1672-4208(2009)15-0016-02 　　 　　冠心病是严重威胁人类生命健康的心血管疾病,不稳定型斑块是导致急性冠状动脉综合征(ACS)的最主要的原因。从分子病理机制研究不稳定型斑块对防治ACS的发生具有重要临床意义。现已证实VEGF可促进ACS的发生。笔者通过对尸检标本的左右冠状动脉的取材,通过组织形态学观察,免疫组织化学检测的方法,对导致斑块不稳定的因素进行初步研究,分析IL-17和VEGF与斑块稳定性的关系以及它们的相关性, 以探讨IL-17及VEGF是否可作为ACS患者斑块不稳定性的标志物。? 　　 　　1 对象与方法? 　　 　　1.1 对象 选取2006～2009年36例尸检标本,从中获得48个冠状动脉蜡块标本,年龄26～77岁,平均年龄54.2 岁(尸检标本由湘雅医科大学临床病理中心提供)。免疫组化试剂:鼠抗人平滑肌细胞α-actin 单克隆抗体,鼠抗人单核巨噬细胞CD-68单克隆抗体购自深圳晶美生物工程有限公司,兔抗人IL-17单克隆抗体购自深圳晶美生物工程有限公司,兔抗人VEGF多克隆抗体购自深圳晶美生物工程有限公司。α-actin、CD-68 和VEGF为即用型, IL-17为浓缩型,其工作液浓度为1:200。SP试剂盒及DAB显色液购自深圳晶美生物工程有限公司。? 　　1.2 方法 (1)标本的取材:选定标本经常规10%多聚甲醛固定,对标本进行取材,左主干、左前降支、左回旋支及右冠状动脉做间隔1 cm 的连续取材,脱水、透明、石蜡包埋,将所有冠状动脉标本以4 μm 厚度切片。切片经常规脱蜡、水化后, 进行苏木精-伊红( HE) 及免疫组织化学染色。斑块标本根据纤维帽的厚度和炎性细胞与平滑肌细胞的比例,分成稳定型和不稳定型两组。(2)免疫组织化学染色:石蜡切片在60～65 ℃的温箱中烤片2 h ,脱蜡水化,流水冲洗。室温下,3%H?2O?2-甲醇消化内源性过氧化物酶的活性15 min ;抗原修复;室温下加入0.5 %小牛血清白蛋白封闭非特异性抗体15 min ,分别加入一抗,CD-68、α-actin、VEGF湿盒内4 ℃冰箱中过夜(约18 h), IL-17湿盒内4 ℃冰箱中8 h ,室温下预热10 min;室温下适度稀释的生物素化的二抗,湿盒孵育15 min;室温下链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶湿盒孵育15 min;除室温下预热10 min后PBS液洗3次,每次5 min ,余每步骤后PBS液洗3次,每次3 min,擦干。加DAB溶液显色,水洗,苏木素复染,脱水、透明、中性树胶封片。(3)结果判定:巨噬细胞判定:依据CD-68染色,判定巨噬细胞表达IL-17和VEGF情况。平滑肌细胞判定:依据SMCα-actin 染色,判定平滑肌细胞表达IL-17和VEGF的情况。IL-17及VEGF阳性结果判定: 参照许良中等的免疫组织化学反应结果的判定标准[1\]?,综合考虑切片中阳性细胞占所观察同类细胞数的百分比和阳性细胞着色强度两项指标,半定量判断结果。根据切片中阳性细胞占计数细胞百分比分为4级: ≤5%为0分,6%～25%为1分,26%～50%为2分,≥51%为3分。根据显色程度判断阳性强度:基本不着色为0分,淡黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分。将每张切片着色程度