Box―Benhnken的设计效应面法优选黄芪切制工艺.docVIP

Box―Benhnken的设计效应面法优选黄芪切制工艺 　　[摘要] 黄芪始载于《神农本草经》，列为上品，为临床常用中药，切片多生用或蜜炙后应用，目前开展的研究中，对蜜炙工艺研究报道较多，而对黄芪切制工艺则缺少相关的研究报道，黄芪切制目前多凭药工经验操作，没有具体的切制工艺参数，很容易出现有效成分流失?发生霉变等多种问题，导致目前市场上流通的黄芪饮片质量良莠不齐，饮片和制剂的质量难以控制，严重影响了临床疗效，针对上述问题，该实验以优选黄芪的最佳切制工艺为研究目的，采用响应面分析法中的Box-Benhnken中心组合设计，以黄芪甲苷?毛蕊异黄酮苷含量和外观性状为考察指标，选择软化润制时间?干燥温度和干燥时间3个因素对黄芪切制工艺进行优选，得到了实验室最佳切制工艺参数：润制时间3 h，干燥温度50 ℃，干燥时间4 h?验证试验表明，确定的黄芪切制工艺稳定可行，对于规范黄芪切制工艺有一定的意义? 　　[关键词] 黄芪；Box-Benhnken设计；响应面法；切制工艺；黄芪甲苷；毛蕊异黄酮苷 　　[收稿日期] 2014-02-13 　　[基金项目] 中医药行业科研专项 （20110700705）；山东省科技发展计划项目（2011-170）；国家中医药管理局全国名老中医药专家传承工作室建设项目 　　[通信作者] 孙立立，研究员，主要从事中药新药与中药炮制原理研究，Tel：（0531 　　[作者简介] 沈秀娟，硕士研究生，E-mail：mingming126.com 　　黄芪为临床常用的大宗中药品种，是豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus （Fisch.）Bge. var. mongho licus （Bge.） Hsiao或膜荚黄芪A. membranaceus （Fisch.）Bge.的干燥根，具有补气固表?利尿托毒?排脓?敛疮生肌的作用[1]?此外还具有增强机体免疫力?抗病毒以及对心血管系统作用等?黄芪是历版《中国药典》的收载品种，黄芪饮片的制备方法，《中国药典》2010年版规定为“除去杂质，大小分开，洗净，润透，切厚片，干燥，无具体工艺参数?在黄芪饮片软化切制过程中，多凭药工经验操作，存在着软化浸润时间不一，成分流失等现象，特别是长时间不合理软化浸润，易出现有效成分大量流失和霉变等问题[2]，导致黄芪饮片存在质量参差不齐，严重影响临床疗效?因此有必要对黄芪的切制工艺进行研究优选，以保证黄芪饮片的质量和临床疗效? 　　本实验采用Box-Benhnken效应面法，以传统质量指标（外观性状）和现代质量指标（黄芪甲苷?毛蕊异黄酮苷含量）为考察指标，对黄芪的软化切制工艺进行了优选，本研究可为黄芪饮片切制加工提供科学依据，对提高黄芪饮片质量具有较大意义? 　　1 材料 　　2965高效液相色谱仪（美国Waters）；2996二极管阵列检测器（美国Waters），蒸发光散射检测器（ELSD）（岛津3300） ；XS205DU型电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；DHG-9146A电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；旋转蒸发仪RE-2000（上海亚荣生化仪器厂）? 　　黄芪药材购自山东博康中药饮片厂，产地甘肃，经山东省中医药研究院林慧彬研究员鉴定为豆科植物蒙古黄芪A. membranaceus的干燥根? 　　黄芪甲苷（批号110781-200613，供含量测定用，中国食品药品检定研究院）；毛蕊异黄酮苷（批号120312，纯度≥98%，上海丽臣商贸有限公司）；乙腈?甲醇（色谱纯，迪马科技），水为蒸馏水；其余试剂为分析纯? 　　2 方法与结果 　　2.1 黄芪甲苷含量测定 　　2.1.1 色谱条件 Dikma Diamonsil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相乙腈-水（32∶68）；蒸发管温度80 ℃，雾化温度50 ℃，空气流速1.5 L?min-1，流速1.0 mL?min-1，进样体积10 μL，柱温35 ℃，蒸发光散射检测器检测?理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4 000? 　　2.1.2 对照品溶液的制备 取黄芪甲苷对照品适量，置于五氧化二磷减压干燥器中干燥24 h后，精密称取2.14 mg黄芪甲苷对照品置于5 mL量瓶中，用色谱甲醇定容至刻度，摇匀，得到0.428 g?L-1的黄芪甲苷对照品溶液? 　　2.1.3 供试品溶液的制备 取本品中粉约4 g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40 mL，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4 h，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10 mL，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取4次，每次40 mL，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40 mL，弃去氨液，正