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HBV母婴垂直传播相关的影响因素的研究 　　[摘要] 目的 探讨妊娠合并HBV感染的孕妇母婴垂直传播的相关影响因素。方法 收集100例乙肝病毒携带孕妇及其100例新生儿作为研究对象，采用双抗体夹心时间分辨免疫荧光法（IFMA法）检测孕妇HBsAg和HBeAg，实时荧光定量PCR法检测HBV DNA载量，并用流式细胞仪检测新生儿脐血中NK细胞CD69和IFN-γ，并对以上指标的相关性进行统计分析。结果 母血中HBsAg单阳性与HBsAg/HBeAg双阳性组间母婴垂直传播比率差异有统计学意义（P0.05）。 结论 母血HBeAg阳性与否、HBV DNA病毒载量高低直接决定着母婴HBV垂直传递的风险，同时T淋巴细胞中活化标志物CD69表达水平与母婴HBV垂直传播相关，该研究的结果为临床研究HBV母婴传播的机理及其预防措施，减少HBV携带者，提高新生儿出生质量有重要意义。 　　[关键词] HBV感染；母婴垂直传播；影响因素 　　[中图分类号] R4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）10（a）-0044-03 　　我国是乙型肝炎的高发区，母婴传播是乙型肝炎病毒（HBV）传播的一条重要途径，亚洲HBV感染者中有30%～50%是通过母婴传播形成的，我国每年约26万新生儿通过母婴传播途径感染HBV[1]，阻止母婴传播是控制乙肝流行的主要环节。大量的研究发现NK细胞在HBV感染早期的病毒清除和慢性HBV感染患者肝脏病变过程中都起到了十分重要的作用，但关于NK细胞在HBV母婴传播中的作用并不清楚，因此，该研究检测妊娠合并HBV感染的孕妇及其新生儿的外周血的HBsAg、HBeAg以及HBV DNA载量，并检测脐血中NK细胞表面IFN-γ和CD69的表达水平，以探讨NK细胞在HBV在母婴传播中的作用。报道如下。 　　1 对象与方法 　　1.1 研究对象 　　根据2005年中华医学会肝病学分会修订的《慢性乙型肝炎防治指南》诊断标准，选择2009年1月―2013年12月在云南省昆明市延安医院妇产科分娩的无症状乙肝病毒携带孕妇共计100例（母血中HBsAg单阳性、HBsAg /HBeAg双阳性）及其新生儿100例作为研究对象。所选病例孕期均无先兆流产或先兆早产及妊娠期高血压病史以及无其他原发性疾病，肝功能正常，孕期未使用其他研究药物或全身抗病毒、细胞毒性、类固醇激素或免疫调节剂等药物。另外，收集同期就诊的乙型肝炎病毒携带隐性的健康孕妇分娩的新生儿脐血40例作为正常对照，其中病例组与正常对照组间分娩时胎龄均在36～41周之间，分娩方式均按正常待产拟定治疗方案，两组间比较，差异无统计学意义（P0.05）。 　　1.2 研究方法 　　1.2.1 标本采集 孕妇分娩前采集静脉血3 mL，分两份分离血清，分别进行HBV DNA 检测和乙型肝炎5项检测。新生儿于分娩时在碘伏消毒过的脐带处采集脐血5 mL，分离血清做HBV DNA检测，分娩12 h内采集桡动脉血，分离血清储存于-20 ℃中保存待测。 　　1.2.2 检测方法 ①乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）采用双抗体夹心时间分辨免疫荧光法（IFMA法）：采用WALLAC公司1235全自动时间分辨荧光测定仪对妊娠合并乙型肝炎患者、新生儿、新生儿脐带血进行乙肝两对半定量检测。②HBV DNA 定量检测采用荧光定量PCR 法（美国Bio-Rad公司的DA7600型核酸扩增实时荧光检测系统及上海夏华生物医学工程有限公司实时荧光定量PCR试剂盒），分别设计一堆乙型肝炎病毒特异性引物和一条乙型肝炎病毒特异性荧光探针，用PCR体外扩增发定量检测乙型肝炎病毒DNA，标本的HBV DNA 含量以copies/ ml 表示。③新生儿脐血中NK细胞CD69和IFN-γ采用流式细胞仪（美国BD公司的FACS-Calibur流式细胞仪）检测，取CD3、CD56和CD69抗体（Biolegend公司提供）各5 μL和100 μL血样混匀避光孵育20 min，然后加入1 mL溶血素混匀作用5 min，离心弃上清后加入1M1×LPBS，再离心并弃上清，加入200 μL 1×LPBS上机检测。 　　1.3 新生儿HBV感染的判定标准 　　HBV 感染判定标准新生儿外周血HBsAg阳性和/或HBV DNA 阳性判定为HBV感染存在。 　　1.4 统计方法 　　采用SPSS17.0统计软件包进行统计学分析。运用四格表确切概率法及χ2检验比较组间差异。计量资料均以均数±标准差（x±s）表示， 两组样本组间比较采用t 检验，两组以上均数比较采用方差分析。 　　2 结果 　　2.1 母血中HBsAg、HBeAg与HBV母婴垂直传播的关系 　　ELISA法检测100例