HPLC DAD QTOFMS联用技术的研究大株红景天胶囊指纹图谱.docVIP

HPLC DAD QTOFMS联用技术的研究大株红景天胶囊指纹图谱 　　[摘要] 建立了大株红景天胶囊HPLCDAD指纹图谱分析方法，色谱柱为Agilent Eclipse PlusC18（4.6 mm× 250 mm，5 μm），以流动相甲醇0.1%甲酸水溶液进行梯度洗脱，柱温35 ℃，流速1.0 mL?min-1，检测波长276 nm，采用该方法测定市售10批大株红景天胶囊，并用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A）软件进行指纹图谱分析，确定了21个色谱峰作为指纹图谱共有峰，同时对扣除峰面积超过总峰面积50%的单个共有峰前后10批样品的相似度结果进行分析比较，发现10批样品的相似度均大于0.940。采用HPLC/QTOFMS对指纹图谱中的共有峰进行指认，确定了21个共有峰的分子式，结合对照品及质谱信息对其中11个指纹峰进行结构推断。该研究首次采用HPLC建立大株红景天胶囊的指纹图谱并结合HPLC/QTOFMS对指纹峰进行指认，该方法具有良好的精密度、稳定性和重复性，为大株红景天胶囊的质量评价提供依据。 　　[关键词] 大株红景天胶囊； 指纹图谱； 定性分析； 质量评价 　　大株红景天胶囊由单味药材大株红景天Rhodiola kirilowii （Regel.）Maxim的干燥根及根茎提取、精制而成，具有活血化瘀，通脉止痛的功效，主要用于治疗冠心病、心绞痛等心血瘀阻证，临床疗效显著[13]。目前研究多将红景天苷等少数几个成分作为评价红景天属植物及相关制剂质量的主要指标[47]，大株红景天胶囊现行质量标准也主要通过控制红景天苷的含量来对其进行质量评价及控制，存在一定的局限性。HPLC指纹图谱能比较全面地获得中药化学成分群的特征信息，可以更加客观地对中药进行质量评价和质量控制；HPLC/QTOFMS技术则可以对中药的化学成分结构进行定性表征，以更有效地控制药品质量；综合运用HPLC指纹图谱及HPLC/QTOFMS技术，可以有效地评价中药质量，确保药品疗效[8]。 　　1 材料 　　Agilent 1100高效液相色谱仪，Agilent高效液相色谱质谱联用仪（Agilent Technologies， Germany）；ST16R型高速冷冻离心机（赛默飞世尔科技有限公司）；AL104型1/1万天平，MettlerXS205型1/10万天平（梅特勒托利多上海仪器有限公司）；KH2200B型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）；MillQ纯水系统（Millipore，USA）。 　　甲醇（色谱纯，Merck，USA），乙腈（色谱纯，Merck，USA），甲酸（Merck，德国），其他试剂均为分析纯，购于南京化学试剂有限公司；超纯水。 　　没食子酸、5羟甲基糠醛、rhodiocyanoside A、3，4二羟基苯甲酸、云杉苷、红景天苷、对羟基苯丙烯酸4OβD葡萄糖苷、酪醇、对羟基苯甲酸、没食子酸甲酯、岩白菜素、对羟基苯乙酸、丁香酸、6″Ogalloylsalidroside、草质素、草质素苷、红景天素、山柰酚7OαL吡喃鼠李糖苷等对照品均由江苏康缘药业股份有限公司分离纯化得到，批号均各个对照品采用LCMS测定纯度均大于98%。 　　大株红景天胶囊共10批，均由江苏康缘药业股份有限公司生产，批号分别为150301，150302，150303，150304，150305，150306，150307，150308，150309，150310。 　　2 方法与结果 　　2.1 检测条件 　　2.1.1 色谱条件 色谱柱为Agilent Eclipse PlusC18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相甲醇（A）0.1%甲酸水溶液（B），梯度洗脱（0～10 min，10%～15%A；10～20 min，15%～25%A；20～30 min，25%～40%A；30～60 min，40%～60%A）；柱温35 ℃；流速1.0 mL?min-1；检测波长276 nm。 　　2.1.2 质谱条件 ESI离子源，正、负离子模式检测。干燥气流速10.0 L?min-1；干燥气温度350 ℃；雾化压力413.68 kPa；skimmer 65 V；OCT1 RF Vpp 750 V；毛细管电压，正离子模式4 000 V，负离子模式3 500 V；裂解电压135 V；离子扫描范围m/z 100～1 000。数据采集及处理分别采用 Agilent Mass Hunter Acquisition Software Version A.01.00及Agilent Mass Hunter Qualitative Analysis B.04.00分析软件。 　　2.2 溶液的配制