256-体外受精和早期胚胎的培养知识讲稿.pptVIP

;3.2体外受精和早期胚胎的培养; 1.简述哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤。 2.简述哺乳动物胚胎的早期培养方法。; 1.通过探究式的学习方法，以试管牛为例，得出结论。 2.制定研究课题，组成研究小组，查阅资料，研讨，写出研究报告。;1.体外受精在家畜快繁中的重要意义。 2.哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤。; 我国大多数牛的品种，产肉量或产奶量与国际上的优良品种相比都有一定差距。那么，能不能让引进的良种牛快速地大量繁殖呢？; 我们知道，牛的生育率虽然低，但是母牛体内的卵母细胞却相当多,其卵巢中卵母细胞数要比一生中正常排出的卵子多1000倍。公牛产生的精子数量就更多了。; 如果能够分别采集牛的精子和卵母细胞，让它们在体外完成受精并且发育成一个个小胚胎，再将这些胚胎移植到一个个本地牛体内“借腹怀胎”，不就可以实现良种牛的快速大量繁殖吗？;试管牛工厂化生产的技术流程图解 ;一、卵母细胞的采集和培养; 对于大家畜或大型动物，如牛，采用的主要方法是：从已屠宰的母畜卵巢中取得卵母细胞，也可借助超声波探测仪﹑内窥镜或腹腔镜等工具，直接从活体动物的卵巢中吸取。采集的卵母细胞在体外经人工培养成熟后，才能与获能的精子受精。;用于体外培养的卵母细胞选择和培养: ; 在对家畜体外受精的操作中，一般把未成熟的卵母细胞分成A、B、C、D四级。对A级卵母细胞要求是有3层以上的卵丘细胞包围，卵母细胞的细胞质均匀；B级是少于3层卵丘细胞，但卵母细胞质要均匀；C级为没有卵丘细胞包围的卵母细胞，又称裸卵，培养效果很差；D级是退化或死亡的卵母细胞，应淘汰。A、B两类卵母细胞培养效果较好。;卵母细胞采集器;二、精子的采集和获能; 手握法是通过徒手或戴乳胶手套的手，直接把握雄性动物阴茎，施以适当压力和刺激即可引起射精，并可收集富含精子部分的精液。; 以牛为例，从屠宰场收集卵巢中的卵母细胞进行体外受精的应用效果如何？; 通常采用的精子体外获能的方法有培养法，化学诱导法两种。 培养法:对于啮齿动物﹑家兔和猪等动物的精子。将取自附睾的精子放入人工配制的获能液中，培养一段时间，精子就可获能。 化学诱导法：对于牛羊等家畜的精子。将精子放在一定浓度的肝素或钙离子载体溶液中，用化学药物A23187诱导精子获能。;手握法为公猪采精;三、受精;卵巢;胚胎的早期培养;　　提高受精卵发育率的关键因素是选择理想的培养体系。在家畜中，胚胎培养液分为复杂的和化学成分明确的培养液两大类。复杂培养液中的成分很多，除无机和有机盐外，还添加维生素、氨基酸、核苷酸和嘌呤等营养成分和血清，最常用的有TCM199、B2和F10。用它们培养胚胎时，可以采用体细胞共培养体系，即体细胞与胚胎在微滴中共同培养，利用体细胞生长过程中分泌的有益因子，促进胚胎发育，克服发育阻断。; 受精卵的培养广泛采用微滴法，胚胎与培养液的比例为一枚胚胎用3~10微升培养液；一般5~10枚胚胎放在一个小滴中培养以利用胚胎在生长过程中分泌的活性因子，相互促进发育。胚胎培养条件与卵母细胞成熟培养条件相同。有的实验室采用88% N2、7% O2和5%二氧化碳混合气体培养，以降低培养液中氧自由基浓度，提高胚胎发育率。胚胎在培养过程中要求每48-72小时更换一次培养液，同时观察胚胎的发育状况。当胚胎发育到一定阶段时可进行胚胎移植或冷冻保存，牛、羊受精卵通常培养到致密桑椹胚或囊胚时进行移植或冷冻保存。 ;;2.收集精子的方法 假阴道法﹑手握法﹑电刺激法等;4.卵母细胞采集的方法和操作要领; 方法三：直接从活体动物的卵巢中采集卵母细胞，叫活体采卵。需借助超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜，直接从活的动物卵巢中吸取卵母细胞。后两种方法适用于大家畜和大动物。;5.假阴道法采集精子时的具体体要求;;2.（多选）用化学法使精子获能，采用化学药物是一定浓度的（??? ） 氯化钠溶液???? 肝素???? 钙离子溶液???? D. 磷酸缓冲液??? E. 钙离子载体A23187;3.体外培养哺乳动物胚胎的培养液应用以下哪些成分（??? ） ① 无机盐?? ② 有机盐?? ③ 激素?? ④ 蛋白质?? ⑤ 葡萄糖?? ⑥ 维生素?? ⑦ 氨基酸?? ⑧ 核苷酸??? ⑨ 脂肪酸???⑩ 血清 ①②④⑤⑥⑧⑨⑩????????? ①③⑤⑥⑦⑧⑩ C. ①②③④⑥⑦⑧⑨⑩???? D. ①②③⑥⑦⑩;4.精子和卵子在体外受精后，应将受精卵移入（??? ） A. 受体动物体内?????? ??? B. 培养箱?????? C. 发育培养液???