SB转座子介导斑马鱼增强子捕获注解分析.PDFVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2017, 33 5 :153-158 SB 转座子介导的斑马鱼增强子捕获注解分析 刘帅军  沈丹  钟继汉  陈伟  王伟  张丽  陈才  杨昆仑  高波  宋成义 （扬州大学动物科学与技术学院 扬州大学农业与农产品安全国际合作联合实验室，扬州 225009） 摘 要 ： 为了建立斑马鱼增强子捕获突变体库及研究功能基因的表达调控模式，制备了SB 转座子介导的增强子捕获转基因 斑马鱼 （F0），通过繁育建立了组织或器官特异表达报告基因绿色荧光蛋白 （Green fluorescent protein，GFP）的品系 （F1）。选择 F1 代的SK-3 系（脑部特异表达GFP）与野生型TU 系斑马鱼交配，收集受精卵 （F2），于24 hpf（Hour post fertilization）、2 dpf（Day post fertilization）、3 dpf、4 dpf、5 dpf、7 dpf 6 个发育阶段检测报告基因绿色荧光蛋白的表达模式；然后通过Splinkerette PCR（SP-PCR） 方法检测SB 转座子在斑马鱼基因组中的插入位置，从而确定捕获的增强子和功能基因 ；最后通过胚胎原位杂交验证内源基因表达 模式。结果表明，在F2 代胚胎不同发育阶段，GFP 表达具有明显的时空特性，前期在前脑，中脑，后脑三个部位均高水平表达， 后期表达部位呈后移趋势，各个发育期表达强度基本无变化，结果提示该捕获增强子具有脑部表达特性。sp-PCR 结果分析表明增 强子位于基因组1 号染色体 35、914、498-35、914、621 位置，在内源性基因ednraa 位点附近。原位杂交结果表明该基因在胚胎 24 hpf 阶段具有转录活性。本研究结果提示SB 转座子介导的增强子捕获技术可高效获得插入突变斑马鱼，对研究基因功能和获得 具有自主知识产权的新基因具有重要作用。 关键词 ： 增强子捕获 ；注解 ；SB ；斑马鱼 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2017-0035 - The Annotation of Enhancer trapping Mediated by the SB Transposon in Zebrafish LIU Shuai-jun SHEN Dan ZHONG Ji-han CHEN Wei WANG Wei ZHANG Li CHEN Cai YANG Kun-lun GAO Bo SONG Cheng-yi - （Joint International Research Laboratory of Agriculture and Agri product Safety ，College of Animal Science Technology ，Yangzhou University，Yangzhou 225009 ） Abstract: In order to establish zebrafish enhancer-trapping mutant library and study the expression and regulation of functional genes，w