第八章-分子发光分析法(修改).ppt

第八章 分子发光分析法 一、分子荧光(MF)分析法 二、分子磷光(MP)分析法 三、化学发光分析法 第七章 分子发光分析法 第七章 分子发光分析法 第七章 分子发光分析法 一、分子荧光与磷光产生过程 二、激发光谱与荧光光谱 三、荧光的产生与分子结构关系 四、影响荧光强度的因素 一、荧光与磷光的产生过程 一、荧光与磷光的产生过程 2.电子激发态的多重度 3.激发态→基态的能量传递途径 辐射能量传递过程 二、荧光(磷光)激发光谱与发射光谱 2.发射光谱 3.荧光光谱的基本特征 3.荧光光谱的基本特征 镜像规则产生原因： 镜像规则产生原因： 三、荧光的产生与分子结构的关系 2.化合物的结构与荧光 四、影响荧光强度的因素 4.内滤光作用和自吸现象 5. 荧光猝灭 第五章 分子发光分析法 一、 仪器与结构流程 二、 荧光分析法和应用 三、 磷光分析法的应用 一、仪器结构流程 2.定量依据与方法 （2）定量方法 3.荧光分析法的应用 二、磷光分析法的应用 第五章 分子发光分析法 一、基本原理 二、化学发光分析的特点 三 装置与技术 一、化学反应发光基本原理 一、化学反应发光基本原理 二、特点 三、装置与技术 四、化学发光分析的应用 4. 荧光物质的自吸猝灭 当荧光物质的浓度较大时，会使荧光强度降低，荧光强度与浓度不成线性关系，称为荧光物质的自猝灭。 自猝灭可能有如下几个原因： (1) 荧光物质分子之间的碰撞能量损失; (2) 荧光物质的自吸收; (3) 荧光物质分子的缔合。 第二节 分子荧光与磷光分析法 Cary Eclipse 荧光分光光度计 荧光、磷光化学/生物发光 美国瓦里安技术中国有限公司 光源 样品池 激发 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 发射 单色器 测量荧光的仪器主要由四个部分组成：激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。 特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。 光源 氙灯 激发单色器 样品池 光电倍增管 数据处理 仪器控制 发射单色器 1.荧光光度计仪器光路图 光源： 氙灯和高压汞灯，染料激光器(可见-紫外区) 光源要求： 发射强度足够且稳定的连续光谱 光辐射强度随波长的变化小 有足够长的使用寿命 高压汞灯: 是以汞蒸气放电发光的光源，一般滤光片式的荧光计多采用它为激发光源。 氙灯: 是目前荧光分光分度计中应用最广泛的一种光源。它是一种短弧气体放电灯，具有光强度大，在200～800nm 范围内是连续光源的特点。 染料激光器: 是一种新型的荧光激发光源。 I0 It IF,p 检测器： 现在的荧光计多采用光电倍增管进行检测。 样品池： 荧光分光光度计 的样品池四面透光。 单色器： 荧光分析仪中应用最多的单色器为光栅单色器，光栅有两块，第一块为激发单色器，用于选择激发光的波长，第二块为发射单色器，用于选择荧光发射波长。在比较低档次的荧光计中，采用滤光片作为单色器。 (1)定量依据 荧光强度 If 正比于吸收的光强度 Ia 和荧光量子效率Φ ： 由朗伯-比耳定律得： 荧光强度 If ： 对于稀溶液，当 ?bC 0.05（磷光? bC 0.01）时： If ----荧光强度 I0 ----入射光强度 Φf ----荧光量子产率 b -- 吸收光程 ? -- 摩尔吸光系数 C -- 物质浓度 Ip ----磷光强度 I0 ----入射光强度 Φp ----磷光量子产率 b -- 吸收光程 ? -- 摩尔吸光系数 C –物质浓度 标准曲线法： F Cs Fx Cx Fx F Cs Cx 直接荧光标准曲线法 荧光熄灭工作曲线法 比较法： 在线性范围内，测定标样和试样的荧光强度，比较。 (1)无机化合物 无机化合物荧光分析有直接荧光法、荧光猝灭法、间接荧光法及催化荧光法等。 （a）直接荧光法 待测元素与有机试剂所组成的能发荧光的配合物，通过检测配合物的荧光强度以测定该元素的含量。 （b）荧光猝灭法 某些元素虽不与有机试剂组成会发荧光的配合物，但可以从其他会发荧光的配合物中取代金属离子或有机试剂，组成更稳定的不发荧光配合物或难溶化合物，而导致溶液荧光强度的降低，由荧光强度降低的强度来测定该元素的含量。 (2)有机化合物和生物 具有荧光特性的有机化合物，生物、药物化合物可直接采用逆光荧光分析法测量。 目前研究热点： 激光诱导荧光研究溶液中单分子行为； 荧光分子作为探针研究DNA。 （c）间接荧光法 间接荧光法常用于某些阴离子如F-、CN-等的分析，它们可以从某些不发荧光的金属有机配