多发性骨髓瘤分子细胞遗传学的研究.docVIP

多发性骨髓瘤分子细胞遗传学的研究 　　摘要：近年来关于多发性骨髓瘤细胞遗传学方面的研究逐渐深入。分子细胞遗传学的进步推动了多发性骨髓瘤细胞遗传学的研究。随着研究技术的不断改进，证实多发性骨髓瘤的细胞遗传学改变多为复杂畸变，涉及多条染色体的数目和结构的异常，其细胞遗传学结果和疾病的诊断、治疗和预后有密切关系。本文对近年来关于多发性骨髓瘤的细胞遗传学研究状况进行阐述。 　　关键词：多发性骨髓瘤；分子细胞遗传学；荧光原位杂交预后 　　多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是一种浆细胞克隆性增生的恶性肿瘤。在血液系统恶性肿瘤中占10%，具有不稳定的遗传学特点，多表现为明显多变的染色体异常，仍属于不可治愈的疾病。MM患者的生存差异较大，从数月至十余年不等。这说明骨髓瘤患者间存在有遗传异质性，主要表现为分化程度不一及细胞和分子遗传特征的差异。随着新的研究技术的不断发展证实几乎所有的MM患者均存在染色体的异常，包括数目和结构的异常，基因表达的异常。各种异常之间有重要的联系，并且这些细胞遗传学的改变与疾病的临床特点密切相关。通过对MM患者细胞遗传学的研究，有助于深入了解疾病的发生，进展机制，制定更加合理的治疗方案。 　　1细胞遗传学检测手段 　　1.1常规细胞遗传学 对MM患者进行细胞遗传学的研究开始于20世纪60年代及70年代早期，当时应用的是非显带技术，仅能发现个别染色体的缺失和克隆标记。随后出现运用G显带技术进行核型分析，由于骨髓中异常浆细胞的比例低，且浆细胞的体外有丝分裂指数低，中期分裂相少等因素，导致MM的细胞遗传学分析有一定的难度，CC分析大多低估了MM的核型改变，异常克隆检出率仅为30%～40%。 　　1.2荧光原位杂交技术 胞浆轻链免疫荧光结合FISH（cIg-FISH）技术，与传统FISH相比无需进行磁珠分选，利用单个核细胞滴片后直接与探针杂交，实验时间较短，费用较低，需要采集的骨髓标本量较少，易于标本的收集。仅需要了解患者的轻链类型，以便选择正确的抗体即可。因此，cIg-FISH是现今国外MM核型检测的主要方法，已常规应用于MM的分子遗传学异常的检测。 　　比较基因组杂交（CGH）能对少量的DNA进行全基因组检测，不需要特殊探针或预先知道畸变发生的区域，可以将基因组的非平衡异常在正常中期染色体上定位及发现新的可能载有重要基因的DNA拷贝数改变。 　　1.3免疫磁珠分选技术 CD138是浆细胞最特异的表面标志之一。CD138分子在正常或恶性细胞表达。但在B淋巴细胞、T淋巴细胞和单核细胞中不表达。还表达在内皮细胞基底外表面、胚胎内质细胞、血管平滑肌细胞、内皮细胞和神经细胞上。以CD138单克隆抗体和免疫磁珠分选出高纯度骨髓瘤细胞，然后进行FISH分析，也是一种常用的MM细胞遗传学研究方法。间期FISH和细胞靶向方法的结合被认为是MM细胞遗传学异常的最佳检测方法，它们的结合对于基因异常和预防疾病的发生意义更为准确。 　　2常见的染色体异常 　　多发性骨髓瘤的核型改变大多数高度复杂，主要可以分为两大类：一类为数目异常，另一类为结构异常，各种异常是之间有一定的联系。超二倍体以3，5，7，9，11，15，19，21号染色体的数目增加为特征：染色体的增加多累及1，7，9，18号染色体等，染色体的丢失主要累积及X染色体，8，13，14号染色体等；非超二倍体包括假二倍体，亚二倍体等异常。结构改变多见，主要涉及1，6，11，14号染色体，染色体的结构异常包括丢失，易位，重复和倒位等。 　　染色体数目的异常 染色体数目异常较易发生。MM常有倍性的改变，且三倍体多于单倍体。三倍体涉及的染色体有3，5，7，9，11，15，19，21号。单倍体涉及的染色体有13，14，16，22号。但是不存在固定的染色体改变。可以根据MM的染色体数目将患者分成四类：超二倍体，亚二倍体，假二倍体，近四倍体（也可称多倍体），其中超二倍体最为常见。一般可将它们归纳为两大类：超二倍体和非超二倍体。通常超二倍体为47～74条染色体，非超二倍体为≤46/47或74（near tetraploid）条染色体。其中非超二倍体常伴有染色体结构的改变。 　　3抑癌基因的失活 　　3.1 p53基因的生物学作用及其失活的结果 p53基因是抑癌基因，主要功能涉及负性细胞增殖及周期调控，维持基因组DNA可塑性和介导程序化死亡等，因而抑制了肿瘤的发生。p53基因位于17号染色体短臂，17p-导致了p53基因的缺失，它是疾病发展的继发性改变，也是揭示多发性骨髓瘤短的生存期的一个强有力的独立的指标，它多出现在Ⅲ期，与疾病的克隆性演变，耐药及遗传学的不稳定性相关。 　　3.2 N-ras，K-ras基因突变的结果及其预后 N-ras突变后生成的P21蛋白