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多脂鳞伞菌丝体多糖抗肿瘤活性的研究 　　多脂鳞伞［Pholiota adiposa(Fr.) Quel.］菌丝体多糖溶液给S-180荷瘤小鼠连续灌胃10 d后，测定对荷瘤小鼠抑瘤率、碳粒廓清指数、小鼠外周血肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-2(IL-2)含量的影响。结果发现，多脂鳞伞菌丝体多糖对荷瘤小鼠肿瘤的抑瘤率为39.54％，并可提高小鼠碳粒廓清指数，血清中IL-2和TNF-α的含量也明显提高。结果提示，多脂鳞伞菌丝体多糖抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长可能与增强宿主的免疫功能相关。 　　碳粒廓清指数；?A白介素-2；?A肿瘤坏死因子-α；?A多脂鳞伞；?A多糖 　　S646.110A 　　 　　多脂鳞伞［Pholiota adiposa(Fr.) Quel.］又名柳蘑、黄蘑、黄伞，属担子菌亚门（Basidiomycotina），伞菌目(Agaricales)，球盖菇科（Strophariaceae），鳞伞属(Pholiota)，是一种食药兼用真菌。多脂鳞伞多糖可预防葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎杆菌和结核杆菌感染[1，2] ，对小白鼠S-180肉瘤和艾氏腹水癌等有较强的抑制作用。 　　现代研究表明，白介素-2(IL-2)主要由激活的Th1淋巴细胞产生，可诱导T细胞增殖和分化，产生杀伤细胞，激活自然杀伤细胞（NK细胞）和淋巴因子激活杀伤细胞（LAK细胞），参与肿瘤免疫治疗。小鼠外周血肿瘤坏死因子(TNF)则作为吞噬细胞产生的一种多肽，既可直接杀伤肿瘤细胞，也可通过活化机体的免疫功能发挥抗肿瘤的作用。本实验研究多脂鳞伞菌丝体多糖对小鼠S-180肉瘤的抑制作用以及增强免疫功能的作用，旨在探讨多脂鳞伞菌丝体多糖抗肿瘤的作用机制。 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1．1材料 　　1.1.1菌种 　　多脂鳞伞菌株(AS 5.170)购自中国科学院微生物研究所菌种保藏中心。 　　1.1.2肿瘤细胞株 　　S-180肿瘤细胞株由黑龙江省肿瘤防治研究所提供。 　　1.1.3实验动物 　　昆明种小鼠86只，雌雄各半，体重20～24 g，由佳木斯大学实验动物中心提供（许可证号：黑动字）。 　　1.1.4主要试剂和仪器 　　环磷酰胺为江苏恒瑞医药股份有限公司产品，印度墨汁为青岛海博生物制剂公司产品，TNF-α试剂盒和IL-2试剂盒为北京福瑞生物公司产品。 　　1.2方法 　　1.2.1多脂鳞伞菌丝体多糖的制备 　　液体培养基(％)：葡萄糖3，酵母粉0.5，K??2HPO??4 0.3，MgSO??4 0.15，自然pH。培养基装量为100 mL/300 mL摇瓶。按10%（v/v）的接种量接入多脂鳞伞菌丝体液体菌种；摇瓶置于旋转式恒温水浴摇床上，150 r/min、26 ℃培养7 d。过滤得菌丝体，将其干燥。菌丝体干粉95 ℃热水浸提2 h，过滤，得上清液，残渣重复提取2次，滤液合并、浓缩，加1倍体积的氯仿∶正丁醇(5∶1)脱蛋白3次，再加三倍体积的95%乙醇沉淀, 5740 ×g离心，收集沉淀，乙醚洗涤，冷冻干燥得多脂鳞伞菌丝体粗多糖。 　　1.2.2荷瘤小鼠模型制备 　　S-180腹水瘤细胞以无菌方法接种于6只小鼠腹腔内，每只小鼠接种浓度为1×1013个/mL 的S-180细胞 1 mL，腹腔传两代后，选取腹腔内接种9 d、生长良好的腹水型S-180荷瘤小鼠，颈椎脱臼处死，无菌抽提腹水，用生理盐水稀释至细胞浓度为1×107个/mL，接种于78只小鼠右后肢腹股沟皮下，每只接种0.2 mL。 　　赵永勋，等：多脂鳞伞菌丝体多糖抗肿瘤活性研究 　　1.2.3实验动物分组及给药方法 　　造模24 h后，将78只小鼠随机等份分成对照组、环磷酰胺组和多脂鳞伞菌丝体多糖组。对照组灌胃生理盐水0.3 mL，并腹腔注射生理盐水0.2 mL。环磷酰胺组灌胃生理盐水0.3 mL，并腹腔注射环磷酰胺（20 mg/kg?d）0.2 mL。多脂鳞伞菌丝体多糖组灌胃多脂鳞伞菌丝体多糖（400 mg/kg?d）0.3 mL，并腹腔注射生理盐水0.2 mL。连续给药10 d，每天1次。 　　1.2.4抑瘤率检测 　　末次给药24 h后处死小鼠，剥离瘤体，称重，计算抑瘤率。 　　抑瘤率(%)=(对照组瘤重一用药组瘤重)/对照组瘤重×100。 　　1.2.5碳粒廓清指数测定 　　取末次给药24 h后小鼠，按0.1 mL/10 g体重的量尾静脉注射稀释3倍的印度墨汁。2 min和l5 min后，分别从内毗静脉丛取血20 μL，加到2 mL Na??2CO??3溶液中，用紫外可见分光光度计测定在600 nm处的A值，以Na??2CO??3溶液作空白对照。小鼠取血后处死，取肝和脾脏称重，计算廓清指数（k）和吞噬