细胞穿透肽介导的小黑麦小孢子遗传转化研究-中国农学通报.PDF

中国农学通报 2017,33(20):29-34 Chinese Agricultural Science Bulletin 细胞穿透肽介导的小黑麦小孢子遗传转化研究 1,2 1 1 刘大普 ，杨凤萍 ，张晓东 1 （北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心，北京100097； 2 北京农学院植物科学技术学院，北京102206） 摘 要：本研究选用小黑麦小孢子作为供试材料，进行细胞穿透肽介导的植物单倍体细胞遗传转化可行 性研究。提取单核靠边期的小黑麦小孢子进行悬浮培养，将细胞穿透肽与报告基因GFP 的表达框复合 物对小孢子进行转化。转化植株进行了PCR 分子检测，并在荧光体视显微镜下观察外源GFP 基因的表 达情况。共获得21 株候选转基因植株，其中染色体自然加倍植株为10株。T 代加倍植株的PCR 检测 1 结果显示，加倍的转基因株系中有3 个株系的PCR 检测结果呈阳性。通过荧光体视显微镜可在转基因 植株的幼胚部位观测到GFP 蛋白的荧光。以上结果表明外源GFP 基因已经整合到小黑麦基因组上并 且得到表达并稳定遗传。因此，由细胞穿透肽介导的植物单细胞转化是一种有效、可行的植物单细胞转 基因方法。 关键词：小黑麦；小孢子；细胞穿透肽；转化 中图分类号：Q789 文献标志码：A 论文编号：cas CellPenetratingPeptidesMediatedTransformationofTriticaleMicrospore 1,2 1 1 LiuDapu ,YangFengping,ZhangXiaodong (BeijingAgriculturalBiotechnologyResearchCenter,BeijingAcademyofAgricultureandForestryScience,Beijing100097;1 2PlantScienceandTechnologyCollege,BeijingUniversityofAgriculture,Beijing102206) Abstract: Inthisstudy,themicrosporesfrom Triticale c.v.ACUltimawereusedasexplanttostudythe feasibilityofcellpenetratingpeptides(CPPs)mediatedtransformationtoaplantsinglecell.Themicrosporesat mid-to-late-uninucleatestagewereisolatedandculturedinliquidsuspensionmidium.Themextureofcell penetratingpeptides(CPPs)andtheplasmidDNAonlywith GFP gene’sexpressionframewereintroduced intomicrospores.ThetransformantswerescreenedbyPCRandtheexpressionofforeign GFP genewas identfiedwithfluorescencestereoscope. 21 transformedplantswerer