美国白蛾几丁质脱乙酰酶1HcCDA1的克隆表达-中国生物防治学报.PDF

31(3)423-427 中国生物防治学报 Chinese Journal of Biological Control 2015 年 6 月 美国白蛾几丁质脱乙酰酶1 （HcCDA1 ）的 克隆表达与酶活测定 1 1 1 1,2* 1 2 闫晓平 ，赵 丹 ，孙晓彤 ，郭 巍 ，李少雅 ，李 景 （1. 河北农业大学生命科学学院/河北省农作物病虫害生物防治工程技术中心，保定 071000 ；2. 北京农学院植物科学技术学院，北京 102206 ） 摘要：利用RACE−PCR 方法，扩增得到编码美国白蛾Hyphantria cunea Drury 几丁质脱乙酰酶基因HcCDA1 。 将该基因分别在大肠杆菌 BL21 和毕赤酵母细胞Pichia pastoris GS115 表达。经诱导表达后，Western blot 分析表明 HcCDA1 在大肠杆菌中成功表达 61.8 kD 的蛋白，符合预期大小；在毕赤酵母GS115 中成功表达 80 kD 蛋白。酶活性试验显示酵母细胞中表达的重组蛋白酶活力为 1.685 U/mL。本研究利用毕赤酵母成功 表达具有酶活力的重组 HcCDA1 蛋白，为进一步明确该蛋白的生理功能提供条件。 关 键 词：美国白蛾；几丁质脱乙酰酶；表达；几丁质脱乙酰酶活性 中图分类号：S763.42 文献标识码：A 文章编号：1005-9261 (2015)03-0423-05 Clone, Expression and CDA Activity of Chitin Deacetylase 1 from Hyphantria cunea (Drury) 1 1 1 1,2* 1 2 YAN Xiaoping , ZHAO Dan , SUN Xiaotong , GUO Wei , LI Shaoya , LI Jing (1. College of Life Sciences, Agricultural University of Hebei/Crop Diseases and Pests Biological Control Engineering Technology Center of Hebei, Baoding 071000, China; 2. Plant Science and Technology College, Beijing University of Agriculture, Beijing 102206, China) Abstract: HcCDA1 cDNA sequence was obtained by PCR and rapid amplification of cDNA ends (RACE). HcCDA1 was expressed in Escherichia coli BL21 and Pichia pastoris GS115, respectively. The HcCDA1 was identified to be a 61.8 kD protein in E .coli BL21 and 80 kD protein in P. pastoris GS115 by Western blot analysis. The CDA activity of recombinant HcCDA1 expressed in P. pastoris GS115 was 1.685 U/mL. The expression of recombinant HcCDA1 will facilitate further investigation of phy