多肽修饰的脂质体靶向肿瘤输送过程的研究-医学专业论文.docx

万方数据 万方数据 多肽修饰的脂质体靶向肿瘤输送过程的研究 STUDIES OF THE TARGETED DELIVERY PROCESS OF PEPTIDE MODIFIED LIPOSOMES TO SOLID TUMORS 学校： 上海交通大学 院系： 药学院 班级： A0817091 学号： 0081709021 博士生： 唐海玲 导师： 徐宇虹教授 申请学位级别： 博士 关键词： 肿瘤靶向治疗，脂质体，EGFR，GE11， 给药屏障 博士学 博士学位论文 多肽修饰的脂质体靶向肿瘤输送过程的研究 摘 要 肿瘤是由于遗传突变和外界环境等多种因素的刺激，诱发人体自身 细胞不能进行正常的生长调控，导致细胞增殖失控的疾病，是目前严重 威胁人类生命的恶性疾病。化学治疗是临床上常规的治疗手段。但是普 通化疗由于缺乏特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时，也同样作用于正常组 织，造成极大的毒副作用。因此如何实现体内特异性靶向肿瘤细胞的药 物输送，避免对正常组织细胞功能的损害显得尤为重要。 目前已上市的具有肿瘤靶向性药物输送系统中，有单克隆抗体、聚 合物、胶束、纳米粒和脂质体。其中脂质体药物输送系统因载体材料的 安全性和生物相容性高等优势一直是研究的热点，这些不同类型脂质体 包括通过 EPR 效应被动靶向肿瘤组织的长循环脂质体，配体修饰的主动 靶向肿瘤细胞的免疫脂质体，对外界因素如光、热、磁、PH 敏感的物理 /化学靶向脂质体，以及具有多功能的智能（smart）脂质体等，都能有 效的实现脂质体药物在肿瘤部位的聚集和释放，降低毒副作用，保护药 物在体内循环系统中不被降解，延长循环时间。然而临床统计数据显示， 通过系统给药后的靶向脂质体虽然能在肿瘤部位有效的聚集，但并不一 能显著的全面提高患者总的生存期。因此，对于影响靶向脂质体药物在 肿瘤部位的分布及其杀伤效应的生理屏障因素，需要进行系统和深入的 研究。 在研究中，我们以 EGFR 为靶点，设计了配体修饰的肿瘤靶向的脂质 体药物输送系统。研究表明 EGFR 在许多实体肿瘤中存在高表达或异常表 达，与肿瘤细胞的增殖、肿瘤血管生成、肿瘤侵袭和转移以及肿瘤细胞 i 凋亡相关。在本实验中，我们选用了通过噬菌体展示肽库筛选的靶向 EGFR 的十二肽 GE11（YHWYGYTPQNVI）作为配体，制备了 GE11 修饰的主动靶 向 EGFR 的脂质体输送系统，并对影响其体内外的肿瘤靶向性，抗肿瘤效 果的处方因素，以及经静脉给药后，到达肿瘤细胞过程中存在的瘤内生 理屏障进行了深入的研究。 首先，我们通过一步合成法得到高纯度的 GE11 修饰的脂质材料 DSPE-PEG2000-Mal-GE11，对构成脂质体的各脂质成分建立了 HPLC-ELSD 定量方法，考察脂质体中各脂质处方比对 GE11 修饰的主动靶向脂质体稳 定性，粒径变化，聚集状态，包封率的影响，得到制备稳定的 GE11 修饰 的主动靶向脂质体的各脂质处方比例范围。 为了考察不同表面密度多肽 GE11 和 PEG2000 修饰的脂质体对 EGFR 的靶向性能，我们选择了三种表达 EGFR 的不同细胞株 H1299、4T1、 SMMC7721,通过流式细胞仪和共聚焦荧光显微镜观察不同表面密度 GE11 和 PEG2000 修饰的脂质体在不同细胞株中吸附和摄取的行为。我们观察 到与直接作用于细胞受体的靶向配体（单克隆抗体、多肽）不同，经配 体修饰的脂质体与膜表面受体结合摄取，会受到处方，细胞类型、配体 在载体表面的密度等多方面因素的影响。通过体外细胞实验，筛选出了 与体外 EGFR 高表达肿瘤细胞特异性结合最优的三个处方，其 PEG 与 GE11 的百分摩尔比分别为（3.5:0.5），（4:2），和(6:2)。 为了考察这三个优化处方经系统给药后在体内的分布和肿瘤靶向行 为的特点。我们通过主动载药的方法制备了这三个不同处方的阿霉素脂 质体。经尾静脉给药后，通过对血液和各组织中不同时间点阿霉素的含 量测定，研究修饰了不同表面密度靶向配体 GE11 的阿霉素脂质体在荷 SMMC7721 皮下移植瘤的动物模型中体内半衰期、组织分布以及由此引起 的不同的肿瘤抑制效果。肿瘤体积生长抑制率和生存率结果显示，虽然 ii 经 GE11 修饰的主动靶向阿霉素脂质体体内半衰期有所下降，但与只含 PEG 的被动靶向长循环阿霉素脂质体比，仍具有明显的抑瘤效果。 为了更好地观察 GE11 修饰的基于主动靶向机理的脂质体输送系统 抗肿瘤的机理，和其向肿瘤组织内部扩散存在的生理屏障，我们对实验 中抑瘤效果存在显著性差异的两个处方，在 SMMC7721 皮下移植瘤的分布 进行了细节的研究。两个处