侧脑室注射抗促甲状腺激素释放激素血清对电针夹脊穴镇痛的影响-针灸推拿学专业论文.docxVIP

目 录 引 言 1 实验研究 2 一、材料与方法 2 （一）材料 2 （二）方法 3 二、结果 6 讨 论 11 一、动物模型的选择及评价 11 二、电针方法的选择依据 11 三、夹脊穴的理论基础 13 四、关于针刺镇痛的的研究 15 （一）针刺镇痛的中医理论依据 15 （二）针刺镇痛机理的现代研究 16 五、关于针刺调节免疫的研究 17 六、结果及分析 18 （一）电针对疼痛的影响 18 （二）电针对 AA 大鼠的免疫调节作用及其机制 19 （三）疼痛与免疫的相关性 19 （四）内源性 TRH 在针刺镇痛及免疫调节中的作用 20 结 语 23 参考文献 24 综 述 27 致 谢 31 PAGE PAGE 10 引 言 疼痛是指由体外或体内的伤害性或潜在的伤害性刺激所引起的痛觉感知和反应， 是机体不可或缺的一种保护机制。疼痛可分为生理性疼痛（急性痛）、炎症性痛和神 经病理性痛，后两者统称为病理性痛或慢性痛。疼痛对机体可造成一定的伤害，所以 研究疼痛产生的机制和采用有效的镇痛药物及针灸镇痛等手段，是医学的重要课题。 夹脊穴的临床镇痛及调节免疫作用广为认可，关于针刺镇痛及针刺调节免疫 的作用机理，诸多学者们也进行了越来越深入的研究。而针刺在镇痛过程中与调 节免疫过程中是否也通过某些相同的途径产生作用？ 促甲状腺激素释放激素(thyrotropin-releasing hormone，TRH)是一种内源性神经三 肽，除了能促进垂体前叶释放促甲状腺激素和生乳素，还有许多其他的生理功能，包 括自主神经效应和兴奋剂作用。现代研究证实，TRH 及其受体广泛分布于中枢神经 系统，如下丘脑、杏仁核、导水管周围灰质、脊髓等（而这些结构正是内源性痛觉调 制系统的重要结构），除具有促进促激素释放的激素作用外，还表现出神经递质的作 用。那么，内源性神经肽 TRH 在针刺发挥镇痛及免疫调节作用时起着怎样的作用？ 本项研究的任务即是通过侧脑室注射 TRH 对针刺镇痛及免疫调节有着怎样的作 用进行有关研究，探讨针刺镇痛和免疫调节的共同中枢机制。以弗氏完全佐剂 （Freund’s Complete Adjuvant，简称 FCA）注射大鼠足掌建立佐剂性关节炎模型（AA）， 侧脑室注射抗 TRH 血清，应用行为学痛阈观察、高效液相电化学法、放射免疫法等 方法，观察侧脑室注射 TRH 对 AA 大鼠下丘脑β-EP 及 5-HT 含量、血清中 IL-6 含 量及电针（EA）镇痛的影响，初步探讨内源性 TRH 在电针镇痛及免疫共同机制中的 影响。 实验研究 一、材料与方法 （一）材料 1.实验动物 选用健康雄性 Wistar 大鼠，体重 200±20g，2 月龄，由山东大学实验动物中心 提供，许可证号 SCXK 鲁全价颗粒鼠饲料，室温 23℃左右，随意进食和 饮水，24 小时昼夜节律下饲养，适应性驯养 3 天后用于实验。实验开始前进行痛阈 筛选，选取基础痛阈稳定、双侧脚掌缩足反射潜伏期无明显差别，并且缩足反射潜伏 期时间（痛阈值）在 8-16s 之间者用于实验，缩足反射潜伏期时间低于 8s 或高于 16s 者表示动物反应过敏或迟钝，不纳入实验。 2.主要试剂 弗氏完全佐剂（FCA，质量浓度 10g/L）：美国 Sigma 公司产品； 10%水和氯醛溶液：山东大学齐鲁医院； β-内啡肽放免试剂盒：购自第二军医大学神经生物学教研室； IL-2、IL-6 放免试剂盒：解放军总医院科技开发中心放免所生产，生产批号 G 蛋白抗体试剂盒：北京博奥森生物技术有限公司； 抗 TRH 兔血清：北京博奥森生物技术有限公司； 5-羟色胺(5-HT)；标准品（SIGMA. A.R 级）；乙酸钠、柠檬酸、辛烷基磺酸钠、 正二丁胺、乙二胺四乙酸；甲醇（色谱纯）；水为超纯水。 3.主要仪器 针灸针：规格为 ?0.30×15mm 的不锈钢毫针，苏州医疗用品厂有限公司生产； 韩氏疼痛治疗仪：HANS-100A 型，南京联创济生医疗科技有限公司生产； BWE-410A 型热痛刺激仪：中国医学科学院生物医学工程研究所生产，光源为 12V/35W 卤素灯，刺激温度为 45-60℃，可调； 微量进样器：上海光正医疗仪器有限公司生产； 聚乙烯 PE-10 导管，内径 0.28mm，外径 0.61mm，美国 Parsippany 公司生产； JY1002 型电子分析天平：上海精密科学仪器有限公司生产； 脑立体定位仪：安徽淮北正华生物仪器设备有限公司； SN-695 型智能放免γ测量仪：上海核所日环光电仪器有限公司生产； Sn-695B 型免疫计数器：上海核所日环光电仪器有限公司生产。 （二）方法 1.实验动物分组及处