第10章--转座子在基因工程中的应用.pptVIP

第10章 转座子在基因工程中的应用 1.美国遗传学家B．McClintock的转座学说 2. 转座子类型 3. 转座机制 4. 转座子在基因工程中的应用 1.美国遗传学家B．McClintock的转座学说 1951年，提出其六年的研究成果－跳跃基因学说。此学说指出：玉米的染色体中含有跳跃基因，可于染色体上依状况进行移动，而此基因可控制或影响某些构造基因的表达。 1956年再次阐述跳跃基因学说与相关的机制 1970年代末期，分子生物学有进一步的发展后，她的理论才渐渐受到重视与认同，于1983年，获得诺贝尔生理医学奖 Ac(Activator) :自主性转座子，自己能编码转位酶，能自由地在基因组中转座. Ds(Dissociation):非自主性转座子，本身不能编码转位酶，必须依靠Ac转座子产生的转位酶才能产生转座.（玉米色素基因C附近有Ds) SAc: Stable Ac ,去掉Ac中转座酶识别序列 Ac-Ds转座系统 转座子是染色体DNA上可复制和移动的DNA序列。一段DNA顺序可以从原位上单独复制或断裂下来，环化后插入另一位点，并对其后的基因起调控作用，此过程称转座。这段序列称跳跃基因或转座子，可分插入序列（ insertion sequence， IS）、转座子（ transposon，Tn）、Mu 噬菌体（ Mu phage）。按转座方式分复制性和非复制性转座子。 2. 转座子类型 2.1 原核生物中的转座因子 IS是最简单的转座因子，不含任何宿主基因的可转位的DNA序列称为插入序列。它们是细菌染色体或质粒DNA 的正常组成部分。 (1) 插入序列IS IS本身没有任何表型效应，只携带和它转座作用有关的基因，称为转座酶基因。 除IS1以外，所有已知IS序列都只有一个开放阅读框（ open reading frame，ORF） ，翻译起始位点紧接第一个反向重复区，终止点位于第二个反向重复区或重复区附近。IS1含有两个分开的读码框，只有移码通读才能产生功能型转座酶。一般情况下，每个IS转座频率是10－ 4 ～ 10－ 3／世代，恢复频率则低得多，为10－ 7 ～ 10－ 6／世代。 (2) 转座子Tn Tn是一类较大的转座子，除了含有与转座作用有关基因外，还带有抗药基因以及其他基因，如乳糖发酵基因,因此Tn的转座能使宿主菌获得有关基因的特性。Tn分子大小一般在2 ～ 25kb，两端有相同序列，如IR。 某些Tn的IR便是已知的IS，带有IS的Tn也称为复合转座子（ composite transposon） 。Tn5、Tn10和Tn903都属于复合转座子. 不含IS的Tn称为简单转座子（ simple transposon） ，如Tn3等 无论是IS或Tn的两端都有反向重复序列，两端反向重复序列的存在与它们的转座功能密切相关。如Tn3的两个IR中任一个顺式作用元件缺失都会阻止转座。 TnA转座子家族 （3）转座噬菌体 1963年发现了一种特殊的噬菌体，称为Mu（ mutator phage），它是大肠杆菌的一种温和噬菌体，M u几乎可插入宿主染色体任何一个位置上。它 的两端没有黏性末端，插入某基因中就引起该基因突变。其整合方式不同于λ 噬菌体，而类似于转座因子的作用。 Mu是DNA噬菌体，含有38kb线状DNA，两端各带一小段大肠杆菌的DNA，这与该噬菌体插入大肠杆菌染色体上有关。 M u的转座频率比一般的转座子要高。Mu的复制能力和它的转座能力是密切相关的，M u的生存依靠转座，复制转座是其正常生活史中的一种方式。在转座过程中，它摆脱两端原有的细菌DNA 而转座到新的某个位点上。 它是以两种方式转座。在感染宿主细胞时，Mu 不经复制便整合进宿主基因组；在溶菌周期中，拷贝数通过复制转座而扩增。两种方式的转座在转座子和靶位点间有相同反应机制，但反应结果不同 2.2 真核生物中的转座因子 （1）酵母菌基因组中的转座子 目前在酵母中研究得较清楚的转座子是Ty（ transposon yeast，Ty）系列,它们的一般长度约为5 900 bp，两端含有两个称为δ的同向长末端重复序列（ LTR） ，长度约340 bp。δ 因子大约由70%的AT组成，每一个δ 因子都含有一个启动子和一段被转座酶识别的序列 Ty1因子只编码一条长5.7kb的mRNA，转录的启动子位于Ty1因子左端的LTR之中。mRNA编码两种蛋白质。在某些酵母品系中，Ty1因子可多达35个拷贝，但拷贝数因品系不同而有差别。 Ty1因子转座是通过一种RNA 中间产物进行的，其过程类似反转录病毒的复制与整合，所以Ty1因子也称作反转录转座子。一般认为Ty1因子转座时，首先以其DNA 为模板合成一个拷贝的RNA，然后再通过反转录合成一条新的Ty1因子，最后这条新