多聚左旋精氨酸对NCI-H292细胞炎症介质调节作用的研究-老年医学专业论文.docxVIP

5 讨 论 21 6 结 论 26 7 研究不足与展望 26 8 参考文献 26 附 录 31 致 谢 32 综 述 33 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 1 中英文缩略词表 AHR Airway hyperresponsiveness 气道高反应 ECP eosinophil cationic protein 嗜酸性粒细胞阳离子蛋白 EDN eosinophil-derived neurotoxin 嗜酸性粒细胞神经毒素 ELISA Enzyme-1inked immunosorbent assay  酶联免疫吸附实验 EOS eosinophil 嗜酸性粒细胞 EPO eosinophil peroxidase 嗜酸性粒细胞过氧化物酶 IL-6 interleukin-6 白介素-6 IL-8 interleukin-8 白介素-8 IL-13 interleukin-8 白介素-13 LPS lipopolysaccharide 脂多糖 L-NMMA L-NG-monomethyl-arginine L-单甲基-精氨酸 MBP major basic protein 主要碱性蛋白 OD Optical density 光密度 PLA Poly-L-arginine 多聚左旋精氨酸 rpm Rotation per minute 每分钟转速 多聚左旋精氨酸对NCI-H292细胞炎症介质调节 作用的研究 中 文 摘 要 目 的: 研究 NCI-H292 细胞在 多 聚 左 旋 精 氨 酸 （ Poly-L-arginine ） 联合 脂多糖 （lipopolysaccharide,LPS）作用于下白介素-6（interleukin-6,IL-6）、IL-8、IL-13、 嗜酸性粒细胞趋化因子（Eotaxin）的表达水平，以及肝素和 L-单甲基-精氨酸 （L-NG-monomethyl-arginine,L-NMMA）对其细胞因子表达的影响。 方 法: 1. 细胞培养及哮喘微环境模型的建立 将 NCI-H292 细胞培养在含 10%胎牛血清的常规培养基中，每周传代两次；选 择生长状态良好的细胞以 3×105/500μl 密度接种于 24 孔培养板中，用 LPS 预先将 气道上皮细胞激活，模拟哮喘气道上皮细胞模型。 2. 细胞因子水平的测定 按照实验设计分为空白对照组(培养液)、LPS 组(5μg/ml)、多聚左旋精氨酸组 (Max=40μg/ml)、LPS+ poly-L-arginine 组、LPS+ poly-L-arginine +肝素(100u/L)组、 LPS+ poly-L-arginine +L-NMMA(Max=0.8mM)组，并依照分组要求加入不同浓度的 多聚左旋精氨酸、LPS、肝素、L-NMMA；共培养 20 小时，收集细胞上清液。按 照试剂盒说明采用 ELISA 法检测各组 IL-6、IL-8、IL-13、Eotaxin 的表达水平，并 比较各组间的差异。 3. 统计学处理 实验数据采用SPSS16.0统计分析软件分析，数据以 x ±s表示。多组间比较采用 单因素方差分析（one-way ANOVA）；两两比较时方差齐时采用LSD检验，方差不 齐时采用Dunnett’s T3检验。P0.05为差异有统计学意义。 结 果: 1. 在多聚左旋精氨酸作用下，IL-6、IL-8、Eotaxin 的表达水平明显增高，且在多 聚左旋精氨酸为 5μg/ml 时，IL-6、IL8 的表达水平最高；在多聚左旋精氨酸为 20μg/ml 时，Eotaxin 的表达水平最高；但各浓度之间的差异无统计学意义；而单 独 LPS 组、多聚左旋精氨酸组与对照组比较，IL-6、IL-8、Eotaxin 的水平差异无 统计学意义(P0.05)。 2. 在多聚左旋精氨酸作用下，IL-13 的表达未见明显改变；各组 IL-13 的水平差异 无统计学意义 (P0.05)。 3. 将多聚左旋精氨酸、LPS 及肝素共同作用 NCI-H292 细胞时，IL-6、IL-8、Eotaxin 的表达水平明显低于 LPS+ poly-L-arginine 组 (P0.05)。 4. 将多聚左旋精氨酸、LPS 及 L-NMMA 共同作用 NCI-H292 细胞时，L-NMMA 对各组 IL-6、IL-8 的表达无影响(P0.05)。 结 论: 1. 多聚左旋精氨酸能够促进 LPS 诱导的 NCI-H292 细胞 IL-6、IL-8、Eotaxin 的表 达水平，但对 IL-13 的表达水平没有影响。 2. 肝素能够抑制多聚左旋精氨酸联合 LPS 诱导的 NCI-H292 细胞 IL-6、IL-8 的表 达水平，而 L-NM