农杆菌介导的墨兰遗传转化.PDFVIP

542 生 物 工 程 学 报 谢利 等/农杆菌介导的墨兰遗传转化 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn April 25, 2015, 31(4): 542−551 DOI: 10.13345/j.cjb.140358 ©2015 Chin J Biotech, All rights reserved 农业生物技术 农杆菌介导的墨兰遗传转化 谢利，王芬，曾瑞珍，郭和蓉，周玉亮，张志胜 华南农业大学 广东省植物分子育种重点实验室，广东 广州 510642 谢利, 王芬, 曾瑞珍, 等. 农杆菌介导的墨兰遗传转化. 生物工程学报, 2015, 31(4): 542 Xie L, Wang F, Zeng RZ, et al. Agrobacterium -mediated transformation of Cymbidium sinensis . Chin J Biotech, 2015, 31(4): 542 摘 要: 转基因育种是快速定向改良兰花育种目标性状的有效方法，但迄今未见有关墨兰转基因育种的研究 报道。试验以‘企剑白墨’墨兰 Cymbidium sinensis cv. ‘Qijianbaimo’ 的根状茎为受体材料，研究了影响农杆菌 介导墨兰遗传转化效率的因素，以建立有实用价值的墨兰遗传转化技术体系。结果表明，受体的预培养时间、 乙酰丁香酮的添加方式及浓度、农杆菌工程菌液浓度 (OD600) 、侵染时间和共培养时间均对‘企剑白墨’根状茎 的GUS 瞬时表达率有显著影响。以预培养39 d 的根状茎尖为材料，在添加200 μmol/L 乙酰丁香酮，OD600 为 0.9 的工程菌液中侵染35 min 后，转入添加200 μmol/L 乙酰丁香酮的共培养基中培养7 d 时，‘企剑白墨’根状 茎的GUS 瞬时表达率最高，为 11.67%。采用上述条件对‘企剑白墨’墨兰进行遗传转化，经PCR 鉴定和 GUS 染色检测，从400 株再生植株中获得了 3 株转基因植株，转化率为 0.75% 。研究表明通过农杆菌介导法对墨 兰进行遗传改良是可行的。 关键词: 墨兰，农杆菌介导，遗传转化，根状茎 Received: July 7, 2014; Accepted: October 14, 2014 Supported by: The Agricultural Key Science and Technology Project of Guangdong Province (No. 2007A020300009-3), the Combination of Production and Research Project of the Ministry of Education in Guangdong Province (No. 2012B091100480). Corresponding author: Zhisheng Zhang. Tel: +86-20 Fax: +86-20 E-mail: zszhang@ 广东省农业科技攻关项目 (No. 2007A020300009-3) ，广东省教育部产学研项目 (No. 2012B091100480) 资助。 网络出版时间：2014-11-05 网络出版地址：/kcms/doi/10.13345/j.cjb.140358.html 谢利 等/农杆菌介导的墨兰遗传转化