城市农贸市场空气微生物群落特征及抗生素抗性基因污染-环境科学与工程专业论文.docx

Classified Index：X172 U.D.C：579 Dissertation for the Master Degree in Engineering MICROBIAL COMMUNITY CHARACTERISTICS AND ANTIBIOTIC RESISTANCE GENE IN URBAN WET MARKET AIR Candidate： Dong Yufang Supervisor： Prof. Li Ji Academic Degree Applied for： Master of Engineering Environmental Science and Speciality：  Engineering Affiliation： Shenzhen Graduate School Date of Defence： December, 2014 Degree-Conferring-Institution： Harbin Institute of Technology 摘 要 城市农贸市场活禽区属为数不多的的人畜交叉感染区域，活禽肌体和粪便常 携带大量病原菌和抗生素抗性基因，通过空气传播可能会进入人体呼吸系统引起 市场内及周边居民致病，存在较大的健康风险。目前，对农贸市场空气微生物群 落特征和抗生素抗性基因污染情况还不清楚，研究农贸市场环境群落特征和抗生 素抗性基因污染程度，是控制农贸市场污染风险的前提。 本研究以城市典型社区级农贸市场为研究对象，用基于培养采样方式，快速 检测评价农贸市场气溶胶细菌浓度和粒径分布；基于不同细菌浓度环境，建立一 套满足空气微生物群落特征和抗生素抗性基因定性定量需求的气溶胶采样方法。 研究通过高通量测序分析农贸市场气溶胶微生物群落结构、病原菌分布与来源， 并用 qPCR 技术分析农贸市场不同介质进行抗生素抗性基因污染特征。 研究表明，农贸市场细菌污染严重。市场内细菌浓度高于室外 2 个数量级， 其中农贸市场活禽区污染最为严重，高达 105 CFU/m3，采样点随着距离活禽区越 远，细菌气溶胶浓度越低，农贸市场内部一般区域严重污染，各处 PM2.5 占 44.2% 以上，市场门口 10 m 处轻微污染，距市场 100 m 以上清洁。 基于环境细菌浓度，本研究使用大流量 TSP 采样器（流量 1.05 m3/min），建立 了满足空气微生物多样性和抗生素抗性基因分析需求的微生物气溶胶取样方法。 气溶胶收集到采样膜上后，经前处理和试剂盒提取，能科学、高效的回收空气微 生物 DNA 信息，满足后续分析需求。同时，提出了一套空气抗生素抗性基因 （Antibiotic Resistance Genes，ARGs）绝对定量方法。 农贸市场气溶胶微生物中主要细菌类群为变形菌门（平均 30.72%）、拟杆菌门 （平均 13.49%）、厚壁菌门（平均 11.50%）、和放线菌门（平均 9.16%）、蓝藻门 （平均 13.37%）、栖热菌（平均 11.87%）。活禽区气溶胶样品菌群结构与活禽区粪 便菌群结构相近，活禽区气溶胶主导病原菌为棒状杆菌、大肠杆菌、表皮葡萄球 菌和粪肠球菌，病原菌主要来源于活禽粪便，病原菌的数量随着与活禽区距离增 加呈现明显的降低现象。 农贸市场不同介质抗生素抗性基因污染严重。气溶胶样品与农贸市场内部粪 便、地面尘土、冲洗水、水产养殖水 tetC、tetG、sul2、ermC 检出率均在 90%以上， 农贸市场不同介质样品中四种抗性基因含量 tetGsul2ermCtetC。农贸市场及周 边环境气溶胶抗生素抗性基因含量受活禽区气溶胶影响较为明显，活禽区最高， 随距离越远呈依次递减趋势。 农贸市场活禽区是一个病原菌和抗性基因储存库。控制农贸市场病原菌污染 输出从粪便和冲洗水着手更为有效，消毒能有效控制病原菌含量。气溶胶传播方 式和潜在致病风险长期被忽视，对周边居民的影响更为直接和持久，建议逐步控 制和降低活禽交易规模，严控活禽区对整个农贸市场的污染。 关键词：农贸市场；微生物气溶胶；微生物多样性；病原菌；抗生素抗性基因 Abstract Live poultry area of wetmarket is one of the few remaining area of cross-infection to humans and animals. Bodies and faeces of live poultry usually carry a lot of pathogens and antibiotic resistance genes which may enter the human respiratory system through the air to