冲击波对体外培养的鼠成骨细胞增殖分化及粘附迁移的影响-外科学(骨科学)专业论文.docxVIP

摘要 背景：骨折是一种常见多发病。随着现代工业与交通发展所致的高能量损伤、人口老龄 化等一系列因素的影响，骨折不愈合或延迟愈合的发生率日益增高。因此，寻求一种有效 的治疗方法一直是骨科界的重要研究课题之一。体外冲击波是近二十多年来发展起来的一 门新技术，它具有非侵袭性、并发症少等优点，目前已经广泛应用于医学生物领域。体外 冲击波最先应用于治疗泌尿系统结石，后来研究发现冲击波可激活成骨细胞活性，具有潜 在成骨作用，进而促进骨折的愈合，因而更加广泛地用于骨与软组织系统疾病的治疗。文 献报道体外冲击波治疗骨折不愈合或延迟愈合的成功率为 62％~83％，其取得了良好临床 疗效，是治疗骨折不愈合或延迟愈合的一种有效方法。然而冲击波促进骨折愈合的具体机 制目前尚不清楚，虽然很多学者对此进行了深入研究，但关于冲击波对成骨细胞粘附及迁 移影响的研究尚未见报道，本实验即对上述问题进行探讨。 目的：通过应用冲击波作用于体外培养的大鼠成骨细胞，确定冲击波作用的适宜能量值， 观察冲击波对成骨细胞的增殖、分化、粘附及迁移等的影响，通过检测介导细胞粘附的重 要分子——整合素的表达，分析与其相关的细胞信号转导通路，揭示冲击波未被发现的作 用机制。 方法：将原代培养的成骨细胞随机分成冲击波组（SW 组）和对照组，应用不同能量的 冲击波进行处理后接种于 96 孔培养板，根据细胞存活率和细胞增殖情况确定适宜的冲击 波能量值。采用 CCK-8 法细胞增殖测定、细胞分泌碱性磷酸酶测定、茜素红染色、细胞粘 附率测定、伤痕愈合试验、流式细胞术检测整合素 β1 的表达及 RT-PCR 检测整合素 β1 mRNA 的表达等方法，对 SW 组和对照组的细胞增殖、分化、粘附及迁移进行测定。 结果：冲击波处理体外原代培养成骨细胞的适宜能量为 10kV（500），CCK-8 法检测显示 SW 组细胞增殖速度快于对照组（P0.001）；SW 组细胞分泌碱性磷酸酶高于对照组 （P0.001），茜素红染色分析显示 SW 组矿化结节面积明显大于对照组（P0.001），说明 SW 组细胞的分化程度明显高于对照组细胞；细胞粘附率测定显示 SW 组细胞明显高于对 照组（P0.01），整合素 β1 及其 mRNA 的表达均高于对照组（P0.001），说明细胞的粘附 能力明显强于对照组；SW 组细胞迁移的平均距离大于对照组（P0.05），说明 SW 组细胞 的迁移能力明显强于对照组。 结论：采用植块法培养的成骨细胞，经过反复贴壁法进行纯化，可以得到纯度较高的成 骨细胞，并且较好地保持了细胞膜的生物特性，适用于细胞学方面的实验研究。适宜能量 冲击波可促进成骨细胞的增殖、分化、粘附及迁移，整合素 β1 在细胞粘附及迁移过程中可 能扮演了重要的角色。冲击波作用于大鼠成骨细胞后，可能通过上调整合素 β1 的表达，激 活相关细胞内信号通路（包括 FAK、MAPK 等），从而调控成骨细胞的各种生理功能，是 冲击波促进骨折愈合的一种作用机制。 关键词：冲击波；成骨细胞；增殖；迁移；整合素 Abstract Background：Fracture is a common disease but occur to a more frequently unfortunate consequence of nonunion or delayed union because of more high-energy trauma caused by industry and traffic, aging population and other factors. Therefore, it has been being one of the most important studies for orthopedics to explore an effective treatment of this medical problem. Extracorporeal Shock Waves(ESW) is a new doveloping technology in the latest twenty years with the advantages of avoidance of surgery and few complications, and had been widely applied in medicine now. Extracorporeal shock wave treatment was first applied to cure urinary stones. It was found in the later study that shock waves could activate osteo