莪术油对肝星状细胞增殖凋亡及分泌细胞外基质的影响-消化内科专业论文.docxVIP

莪术油对肝星状细胞增殖凋亡及 分泌细胞外基质的影响 （摘 要） 目的：用不同浓度莪术油注射液作用于体外培养大鼠肝星状细胞 T6 细胞株 (hepatic stellate cell-T6 strains, HSC-T6)，检测其对细胞增殖、凋亡及分泌细胞外 基质的影响，以阐明莪术油注射液在治疗肝纤维化方面的作用机制。 方法：用 2.5μg/ml、5.0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml 的莪术油注射液处 理体外高糖 DMEM 培养基培养的大鼠 HSC-T6，分别作用 12h、24h、48h 后， 以 MTT 比色法检测 490nm 波长处吸光度值，计算抑制率,筛选出与阳性药物作 用有显著性差异的药物浓度作为实验分组；流式细胞仪和 TUNEL 法检测莪术油 注射液对 HSC-T6 凋亡的影响；放射免疫法检测莪术油注射液对 HSC-T6 分泌 IV 型胶原（IV collagen ,CIV）、透明质酸（Hyaluronic acid ,HA）和层粘连蛋白 （Laminin ,LN）的影响。设阴性对照组,把 α 干扰素（1000U/ ml）组作为阳性对 照组。 结果：（1）莪术油注射液作用于体外培养大鼠 HSC-T6 后，细胞增殖受到明显 抑制，呈时间和浓度依赖性，各浓度组与阴性对照组相比较差异有显著性( P 0.05 )，2.5μg/ml、5.0μg/ml 组与阳性对照组比较差异无统计学意义（P0.05）。 10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml 浓度组与阳性对照组相比较，除 10μg/ml 浓度组作 用 12h、24h 时差异无统计学意义（P0.05）外，其余差异均有统计学意义 ( P 0.05 )；40μg/ml 组与 HSC 作用 48h 后，抑制率达 82.6%，明显高于阳性对照组 （41.4%）。（2）流式细胞仪分析：莪术油注射液 10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml 组、α 干扰素组与 HSC 作用 12h、24h 、48h 后，与阴性对照组相比较差异均有 显著性( P 0.05 )；与阳性对照组比较，除药物浓度组 10μg/ml 作用 12h 时差异 无统计学意义外（P0.05），其余差异均有统计学意义( P 0.05 )。 TUNEL 检测 表明，光镜下细胞核中有棕黄色颗粒者为凋亡细胞，莪术油注射液 40μg/ml 组作 用 48h 后凋亡率（48.39±6.14）％明显高于 α 干扰素组（26.90±4.32）％。（3） 莪术油注射液 10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml 组作用于 HSC-T6 48h 均能不同程度 抑制 CIV、HA 和 LN 分泌，与阴性对照组比较差异有显著性( P 0.05 )；与阳性 对照组比较，除药物浓度组 10μg/ml 抑制 LN 差异无统计学意义外（P0.05）， 其余差异均有统计学意义( P 0.05 )。 结论：莪术油注射液可明显抑制体外培养 HSC-T6 的增殖及分泌细胞外基质， 并能显著促进 HSC-T6 凋亡，可能是莪术油注射液抗肝纤维化的作用机制之一。 关键词：莪术油注射液；肝星状细胞；增殖；凋亡；细胞外基质 Effects of Zedoary Turmeric Oil Injection on Proliferation and Apoptosis and Extracellμlar Matrix Secretion of Hepatic Stellate Cells (abstract) Objective Cultured rat hepatic stellate cell-T6 strains were treated with different concentrations of Zedoary Turmeric Oil Injection（ZTOI） to investigate its effects on proliferation and apoptosis and extracellμlar matrix secretion of hepatic stellate cells T6 strains(HSC-T6) . Therefore the mechanisms of the Zedoary Turmeric Oil Injection counteracting liver fibrosis coμld be revealed. Methods Rat hepatic stellate cell-T6 strains were cultured in high-glucose-DMEM and then treated with different concentration