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微滴度pcr(ddpcr)原理和应用
第三代PCR技术——ddPCR的原理和医学应用
ddPCR
droplet digital PCR
微滴式数字PCR
陈燕飞，Ph.D.
Field Application Specialist, Bio-Rad Laboratories
主要内容
ddPCR的基本原理
ddPCR的技术特征
ddPCR的医学介绍
（ddPCR ，droplet digital PCR ，微滴式数字PCR ）
主要内容
ddPCR的基本原理
（什么是数字PCR ？什么是微滴式数字PCR / ddPCR? ）
PCR技术的发展历程（1983-2015年）
第一代 第二代 第三代
更灵敏
更准确
更精确
T100 Thermal Cycler CFX96/384 Real-time PCR QX200 Droplet Digital PCR
普通PCR Real-time PCR 数字PCR
定性分析 间接定量分析 直接定量分析
（依赖C 或C 值，标准品） （无需标准品，绝对定量）
t q
第三代PCR技术——数字PCR （digital PCR, dPCR）
基本原理：0或1的反应 （以ddPCR为例）
泊松分布
: 靶标分子
●: 阳性微滴（1）
○: 阴性微滴（0）
: 背景分子
有限稀释 PCR扩增 泊松分布
一个 成千上万个 阴性微滴比例推算
待分析的PCR反应体系 独立的PCR反应体系 起始靶分子的绝对量
数字PCR的核心思想
1992年数字PCR思想的提出
Alec Morley
利用有限稀释，终点PCR和泊松分布实现核酸浓度的绝对定量
The combination of limiting dilution, end-point PCR, and Poisson statistics could yield
an absolute meas
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