生物化学实验-层析实验教学幻灯片.pptVIP

实验项目：氨基酸（单向）纸层析;1.2 层析的基本原理 层析法各种各样，但基本原理是一致的。它是利用混合物中各组分理化性质（分子形状和大小、带电状态、溶解度、吸附能力、分配系数、分子极性以及分子的亲和力等）的差别，使各组分以不同程度分布在两相中，其中一相为固定的（称为固定相），另一相则流过此固定相（称为流动相），造成流动相对固定相作单相相对运动，流动相推动样品中各组分经固定相向前迁移，使各组分迁移速度不同，而对物质进行分离的方法。固定相可以是固体、液体或一种固体和一种液体的混合物，而流动相可以是一种液体或一种气体。;表1-1 层析的一般分类;1.3.1 柱层析 层析柱中的填充物或称支持物都是一些具有亲水性的不溶物质，如纤维素、淀粉、硅胶等。支持剂吸附着一层不会流动的结合水，可以看作固定相，沿固定相流过的与它不互溶的溶剂（如苯酚、正丁醇等）是流动相。由填充料构成的柱床可以设想为由无数的连续板层构成，每一板层都起着微观的“分溶管”作用。当用洗脱剂洗脱时，即流动相移动时，加在柱上端的氨基酸混合物样品在两相之间将发生连续分配，混合物中具有不同分配系数的各种成分沿柱以不同的速度向下移动，分部收集柱下端的洗脱液。收集的组分分别用茚三酮显色定量。;图1-1 柱层析示意图;1.3.2 薄层层析 图1-2 薄层层析装置。薄层层析分辨率高，所需样品微量，层析速度快，可使用的支持剂种