临床基因扩增检验的质量保证.课件.pptVIP

对临床标本中可能存在的抑制/干扰物的质控措施 质控措施： 采用内质控（internal control, IC）（通常称为内标）的方法 内标有两种,即竞争性的和非竞争性的内标。 内标设置的必要性？ * 核酸提取及扩增有效性的质控 已知弱阳性质控样本（基质与待测标本相同）：至少带1份，其最后的检测结果，应是核酸提取和扩增检测的有效性的综合反映。 已知阴性质控样本（基质与待测标本相同）：至少带1份，扩增测定的结果可以判断核酸提取过程中是否发生污染。 * 统计学质量控制 理想的室内质控样本的条件 测定中质控样本的设置、数量及排列顺序 统计学质控的特点 统计质控方法 * 理想的室内质控样本的条件 基质与待测样本一致； 所含待测物浓度接近试验的决定性水平； 稳定； 靶值或预期结果已定； 无已知的生物传染危险性； 单批可大量获得； 价廉 * 测定中质控样本的设置、数量及排列顺序 每次检测究竟使用几个质控样本并排在临床标本中的哪个位置最为适宜？从理论上说，为最大可能地检出实验的随机和系统误差，应每隔几份临床标本插入1份质控样本，但考虑国内目前的实际情况及成本效益，一般来说，如果临床基因扩增检验的标本量不是特别大，定性测定有一份接近cut-off的弱阳性和一份阴性质控样本应可以满足要求。而定量测定则要根据试验的测定范围，采用高、中、低三种浓度的质控样本。至于在测定中的排列顺序，可排于标准品或校准品之后，临床样本之前。 * 临床基因扩增检验室内质控的独特性 即监测污染发生的阴性质控的设置。 应该包括1份阴性原血清样本、1份在标本核酸提取过程中带入的一个空管和仅含扩增反应混合液的管。 * 阴性原血清质控样本的功能 监测实验室的以前扩增产物的污染； 由实验操作所致的标本间的交叉污染； 扩增反应试剂的污染。 * 在标本核酸提取过程中带入的一个空管的功能 基本功能与阴性原血清质控样本相同，但不同的是，其基质为水，不含阴性原血清质控样本中可能有的扩增抑制物，因而对污染的反映更为灵敏； 不能取代原血清阴性样本。 * 仅含扩增反应混合液的管的功能 监测扩增试剂是否发生污染，具有较强的污染鉴别性。 如想鉴别实验室是否发生污染，可将一个或多个空管打开静置于标本制备区30～60分钟，然后加入扩增反应混合液同时以水替代核酸样本扩增，如为阳性，而上述仅含扩增反应混合液的管为阴性，则说明实验室以前扩增产物的存在。 * 统计学质控的特点 检验误差有两类，一是系统误差，一是随机误差。 系统误差通常表现为质控物测定均值的漂移，是由操作者所使用的仪器设备、试剂、标准品或校准物出现问题而造成的，这种误差可以通过前述的措施方法加以控制，是可以排除的。 随机误差则表现为测定SD的增大，主要是由实验操作人员的操作等随机因素所致，其出现难以完全避免和控制。 * 统计学质控的功能 统计学质控的功能就是发现误差的产生及分析误差产生的原因，采取措施予以避免。 开展统计质量控制前，应将可以控制的误差产生因素尽可能地加以控制，这不但是做好室内质控的前提，也是保证常规检验工作质量的先决条件。 * 统计质控方法 基线测定 质控规则的表达方式及定义 Levey-Jennings质控图方法 Levey-Jennings质控图结合Westgard多规则质控方法 累积和 (CUSUM) 质控方法 “即刻法”质控方法 * 基线测定 最佳条件下的变异（Optimal conditions variance, OCV）和常规条件下的变异（Routine conditions variance, RCV）； 当RCV与OCV接近，或小于2 OCV时，则RCV是可以接受的。以上为批间变异。 批内变异的测定； 室内质控物的测定准确度的评价。 * 临床基因扩增检验IQC统计计算问题 可使用质控样本扩增后的拷贝数/ml或IU/ml来进行统计计算，也可用其对数值进行。 由于基因扩增结果的原始数据通常很大，故使用其对数值来进行质控统计分析可能要更为方便一些。 * 质控规则的表达方式及定义 质控规则的表达方式 质控规则的功能 常用质控规则的符号及定义 * 质控规则的表达方式 通常质控规则以符号AL来表示，其中A为质控测定中超出质量控制限的测定值的个数，L为控制限，通常用均值或均值±1～3SD来表示。 当质控测定值超出控制限L时，即可将该批测定判为失控。 常用的13S质控规则，其中1为原式中的A，3s为原式中的L，表示均值±3s，其确切的含义为：在质控测定值中，如果有一个测定值超出均值±3s范围，即可将该批测定判为失控。 * 质控规则的功能 简单地说就是用于判断测定批的失控还是在控 。 当整个质控过程中使用同一个质控物时，可用来判断单个或多个测定批内该质控