探讨多波长高效液相色谱法测定杜仲.docVIP

探讨多波长高效液相色谱法测定杜仲 木文采集自网络，木站发布的论文均是优质论文 和著作权归原 所有， 己 o本研宄主要探讨多波长高效液相色谱法测定杜仲3类有效成分的效 果，总结如下。 1仪器与试剂 1仪器超声波清洗器（频率为25 kHz,功率为250 W）;FZ102 型微型植物试样粉碎机；precisa分析天平；UltiMate高效液相色 谱仪。 2试剂二次蒸馏水；甲醇（色谱纯）；杜仲皮（产地：山东）; 京尼平苷酸、桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷、绿原酸对照品。 2方法 1制备供试品溶液称取50 g杜仲药材，将其研制成为絮状 粉末，取2 g左右的样品粉末，将其放置在具塞锥形瓶中，将60 ml 75%的甲醇加入，对其进行称重，进行30 min的超声提取，冷 置，对其进行称重，将减失的重量补足，然后再将其滤过，药渣 再重复上述操作一次。进行两次滤液处理之后将其减压浓缩，并且 采用相同浓度的屮醇溶液对其进行定容，一直到20 ml，对其进行 均匀摇晃，采用0.45 Pm的微孔滤膜对其进行滤过，最后获得供 试品溶液。 2制备对照品溶液称取适量的京尼平苷酸、桃叶珊瑚苷、松 脂醇二葡萄糖苷、绿原酸对照品，将其放置在容量瓶中(10ml)，将 色谱纯甲醇加入到其中，将其溶解，并将其稀释到刻度，对其进 行摇晃，将其制备成为对照品混合储备液，具体的浓度：桃叶珊瑚 苷为0.70g/L、松脂醇二葡萄糖苷力0. 50 g/L、绿原酸为3.32g/L、 京尼平苷酸为1. 20 g/L,采用冷藏的方式进行保存。 3色谱具体条件进样量为10 ul;检测波长分别为320、280、 240、210 nm；柱温为25°C;流速为1. 0 ml/min;流动相为甲醇-0. 1% 磷酸水梯度洗脱；色谱柱为Dionex C18柱(250 mmX4. 6 mm, 5 U m)o 3结果与分析 1优化提取条件提取方法采用回流法与超声法，根据己经 拟定好的色谱条件，分别采用两种提取方式对提取的样品进行测定， 将4种有效成分的峰面积之和作为考察的具体指标，结果显示出两 种提取方法不具备较大的差异性，但是超声提取这种方式具有快捷、 简单等优点，所以最终选用超声提取法对样品进行提取。 2优化超声提取条件称取2 g杜仲药品，一共有9份，对 超声提取杜仲中主要活性成分提取时间、提取次数、料液比以及溶解 浓度等影响因素进行L9 (34)正交试验[7-10],结果显示最好的提 取方案?椋毫弦罕？1 g/30 ml、75%中醇、进行3次超声提取，将每 次提取的时间控制在30 min。其次，结果显示料液比对杜仲中主要 成分的提取影响最大，其次为提取次数、屮醇浓度、反应时间。 3优化色谱条件检测波长的选择：对样品采用PDA-3000光 电二极管进行全波长扫描，为了能够达到干扰小、吸收强的目的，对 京尼平苷酸、桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷、绿原酸各物质的光谱 性质差异进行利用，将3D-plot图谱作为依据，最终决定采用四波 长进行检测［11-13］，具体力：320 nm测定绿原酸、280 nm测定松 脂醇二葡萄苷、240 nm测定京尼平苷酸、210 nm测定桃叶珊瑚苷。 在这种条件下，能够获得最多的图谱信息量，并且具有较好的峰形， 基线平稳，溶剂受到的干扰少，能够对各种物质进行准确的分析。 优化流动相：对甲醇-乙腈、乙腈-水、甲醇-水分别进行梯度洗 脱比较，结果显示，在中醇-水位流动相时，分离较好，出峰较 多，但是会有拖尾现象出现，所以将磷酸快加入到流动相中，以 此来达到消除拖尾的S的。结果显示，甲醇-0.1%磷酸水梯度洗脱时, 能够获得理想的色谱峰分离度以及峰形，具有较好的程序稳定性。 3. 4方法学考证线性关系考察：采用流动相溶液将对照品储备 液稀释，并且配备成为对照品系列溶液，桃叶珊瑚苷：0.08、0.17、 0. 35、0. 70、1. 40 g/L；松脂醇二葡萄糖苷：0. 06、0. 12、0. 25、0. 50、 1.0 g/L；绿原酸:0.42、0.83、1.66、3.32、6.64 g/L；京尼平苷 酸：0.15、0.30、0.60、1.20、2.40 g/L。分别进样 5 ul,对-其 进行55次平行测定，结果显示，京尼平苷酸、桃叶珊瑚苷、松脂 醇二葡萄糖苷、绿原酸的峰面积和其进样浓度具有良好的线性关系。 方法的稳定性、重复性以及回收率分析：选取相同批次的5份供 试品，采用供试品溶液制备以及检测方法对其进行测定，对其秉复 性的RSD进行计算，结果显示，在24h内，试品溶液具有较好的 稳定性，并且实验的重复性好。 3. 5杜仲样品测定取约2 g 的杜仲样品粉末，对其进行精密称定，放置在具塞锥形瓶中，采 用优化后的提取方案提取样品，并且在最优色谱条件下对其进行测 定，结果分别在