裂盖马鞍菌粗多糖清除自由基活性的研究.docVIP

裂盖马鞍菌粗多糖清除自由基活性的研究 　　摘要:采用热水浸提法提取裂盖马鞍菌(Helvella leucopus Pers.)子实体粗多糖,然后分别采用DPPH 法、水杨酸法、邻苯三酚自氧化法测定粗多糖清除二苯代苦味酰基自由基(DPPH#8226;)、羟自由基(#8226;OH)和超氧阴离子自由基(#8226;O-2)的活性。结果表明,裂盖马鞍菌子实体水溶性粗多糖得率为21.92 mg/g(干重);在试验条件下,粗多糖对DPPH#8226;、#8226;OH和#8226;O-2最高清除率分别为96.88%(5 mg/mL)、94.48%(10 mg/mL)和92.82%(10 mg/mL),对DPPH#8226;、#8226;OH和#8226;O-2清除作用的EC50分别为0.68 mg/mL、0.85 mg/mL和0.59 mg/mL;裂盖马鞍菌子实体粗多糖具有一定的体外抗氧化活性。 　　关键词:裂盖马鞍菌;多糖;自由基;抗氧化 　　 　　裂盖马鞍菌(Helvella leucopus Pers.)是一种珍稀名贵的美味野生食用菌,因主产于新疆南部塔里木盆地北缘的巴楚县而得名巴楚蘑菇,分布于河北、甘肃、新疆等地[1]。裂盖马鞍菌子实体中的蛋白质、多糖及多种人体必需氨基酸含量高于平菇、香菇及黑木耳等食用菌,具有较好的开发前景[2]。自由基被认为是机体衰老和某些慢性病发生的原因之一。研究结果表明,食用菌多糖具有清除自由基、提高抗氧化酶活性和抑制脂质过氧化的作用,从而起到保护生物膜和延缓衰老作用[3]。近年来,关于裂盖马鞍菌的营养成分及生物学特性的研究有些报道,但对其抗氧化活性的研究鲜有报道[4]。因此,本文对裂盖马鞍菌子实体水溶性多糖抗氧化活性进行初步研究,以期为开发利用这一宝贵的生物资源提供依据。 　　 　　1 材料与方法 　　 　　 　　1.1材料 　　裂盖马鞍菌子实体采自新疆阿拉尔地区。 　　1.2试剂 　　2,6-叔丁基对甲酚(BHT)为天津市光复精细化工研究所产品,维生素C(VC)和硫酸亚铁为上海山浦化工有限公司产品,邻苯三酚和蒽酮为天津市致远化学试剂有限公司产品,水杨酸和双氧水为国药集团化学试剂有限公司产品,以上试剂均为分析纯;二苯代苦味酰基自由基(DPPH#8226;)为Sigma公司产品。 　　1.3试验方法 　　1.3.1粗多糖的提取 　　将裂盖马鞍菌子实体阴干,粉碎,过80目筛,称取100 g,以无水乙醇(W∶V=1∶10)浸泡48 h,过滤,残渣干燥后加蒸馏水(W∶V=1∶10),80 ℃水浴提取4 h,共2次,合并提取液,减压浓缩至100 mL,加Sevag试剂除蛋白[5],重复8次,余液加4倍体积95%乙醇,置于4 ℃冰箱过夜,1 500 g离心10 min,弃上清,沉淀物置于干燥箱中干燥,即为粗多糖。 　　 　　1.3.2多糖含量测定 　　粗多糖样品中总糖含量和还原糖含量分别采用蒽酮-硫酸法[6]和3,5-二硝基水杨酸比色法测定[7]。多糖得率(%)=(总糖质量-还原糖质量)/子实体原料质量×100。 　　1.3.3测试样品制备 　　阳性对照VC、BHT和受试多糖样品采用超纯水溶解,制成浓度为10 mg/mL、5 mg/mL、2 mg/mL、1 mg/mL、0.5 mg/mL和0.1 mg/mL样品。 　　1.3.4清除DPPH#8226;活性测定 　　用无水乙醇配制2×10-4 mol/L DPPH#8226;溶液,避光保存(0~4 ℃)。分别取阳性对照/受试多糖样品溶液2 mL(以无水乙醇为阴性对照),与2 mL DPPH#8226;溶液混合均匀,在黑暗中放置30 min后,测定525 nm处吸光度A,并以下式计算其清除率: 　　 　　清除率=[(Ac-Ai)/Ac]×100%(Ac:无水乙醇+ DPPH#8226;溶液的吸光度;Ai:待测液+ DPPH#8226;溶液的吸光度) 　　1.3.5清除#8226;OH活性测定 　　在陈留勇等[8]改良的水杨酸法基础上略作改动。8 mL反应体系中,含9 mmol/L FeSO4 2 mL,9 mmol/L水杨酸-乙醇2 mL,阳性对照/多糖样品溶液2 mL,8.8 mmol/L H2O2 2 mL。其中H2O2最后加入,37 ℃反应30 min,以超纯水为参比,在510 nm下测定各待测样品的吸光度。 　　清除率(%)={[A0-(AX-AX0)]/A0}×100(A0:为超纯水的吸光度;AX:为加入阳性对照/多糖样品液后的吸光度;AX0:为阳性对照/多糖样品溶液本底吸光度) 　　1.3.6清除#8226;O-2活性测定 　　采用改良邻苯三酚法测定清除#8226;O-2活性,在试管中加入Tris