不同电转仪电转参数、质粒用量和拓扑结构对.PDFVIP

篷付Hereditas(Beijing)2017年10月，39(10)：930—938 WWW．chinagene．cn 技术与方法 不同电转仪的电转参数、质粒用量和拓扑结构对 猪胎儿成纤维细胞转染效率的影响 钟翠丽1，李国玲1，莫健新1，全绒1，王豪强1，李紫聪1，吴珍芳1，一， 张献伟1’2 1．华南农业大学国家生猪种业工程技术研究中心，广州510642； 2．广东温氏食品集团股份有限公司，新兴527400 fetal 摘要：为获得猪胎儿成纤维细胞(porcinefibroblasts，PFFs)最佳的电转染效率，本研究利用荧光激活细胞分 activatedcell 21和NucleofectorTM 选技术(fluorescencesorting，FACS)辅助优化NEPA 2b两种电转仪电转染PFFs 细胞的参数，比较不同质粒用量和拓扑结构在ECM@830、NEPA21和NucleofectorTM2b中的转染效率。结果 显示：NEPA21电转PFFs的最佳穿孔参数为脉冲电压200V，脉冲长度3ms，脉冲间隔50ms，脉冲次数3 次，脉冲电压衰减幅度10％；NucleofectorTM2b在U．023的转染参数下达到最高转染效率。ECM曾830和 NucleofectortM 21为8 2b的最适质粒用量都为10“g，而NEPAPg；超螺旋质粒比线性化质粒的转染效率更高， 且3种仪器中NucleofectorTM2b转染效果最佳。本研究综合考虑电转仪、电转参数、质粒用量和拓扑结构的影 响因素以优化PFFs的电转条件，为高效制备转基因猪及基因编辑猪的研究奠定基础。 2b 关键词：电转染；猪胎儿成纤维细胞；ECM@830；NEPA21；NucleofectorTM of and struc- Effects parameters，plasmiddosagestopological tureson0ntransfectiontranstecttoneItl of fetalfetaltil3r0131astsfibroblastsn emciencyPorclneporcine different electroporators Cuili Lil，Jianxin Lil， Zhon91，GuolingM01，RongQuanl，HaoqiangWan91，Zicong Wul，一．Xianwei Zhenfang Zhan91，2 China 』．National Research SwineIndustry,South University,Guanzhou510642， EngineeringCenterforBreeding Agricultural China； Food Limited 527400，China 2．GuangdongGroup Company,Xinxing obtainanidealtransfectionof fetal activatedcell Abstract：To fibroblasts，fluorescence efficiencyporcine sorting usedto fortransfectionof fetal ECM@830，NEPA (FACS)wasoptimizeparameters porcinef