鸡粪中氨氮降解菌的分离鉴定及除氨适宜条件研究.PDF

中国农业科学 2016,49(6):1187-1195 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.06.014 鸡粪中氨氮降解菌的分离鉴定及除氨适宜条件研究 刘志云，刘国华，蔡辉益，张 姝，常文环，谢 庆，司彦培 （中国农业科学院饲料研究所/农业部饲料生物技术重点开放试验室，北京 100081 ） 摘要：【目的】氨气是畜禽养殖业中最常见、危害最大的有害气体之一。为了获得用于治理畜禽粪便氨气污 染的微生物，从发酵3 d的鸡粪中分离筛选高效氨氮降解菌，研究其对鸡粪的除氨效果。【方法】以硫酸铵为唯一 氮源，对鸡粪中具有氨氮降解能力的微生物进行连续10 代的富集培养，将获得的富集培养液按10-1 梯度稀释后进 行分离纯化。分离得到的单菌落接种至富集培养基中，培养 24h 后，测定培养基中剩余的氨氮含量，比较各菌株 之间的氨氮降解率，筛选出具有高效氨氮降解能力的菌株。通过形态观察、分子生物学以及生物化学的方法进行 菌株鉴定。研究不同温度（20℃、25℃、30℃、35℃、40℃）和 pH（3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0 ）对 菌株生长的影响，探索不同碳源（淀粉、甘露醇、柠檬酸钠、葡萄糖、乙酸钠、碳酸氢钠）、C/N（5、10、20、40） 以及初始氨氮浓度（100、300、600、1 200mg·L-1 ）对菌株氨氮降解性能的影响。最后将得到的目标菌株制成菌悬 液，按10%的接种量接种到鸡粪中，同时以等量无菌生理盐水作为对照组，分别培养24 h、48 h、72 h和96 h， 测定鸡粪的氨气散发量以及不同形态氮素的变化情况，评价目标菌株对鸡粪的除氨效果。【结果】通过富集培养， 从鸡粪中共分离出15株能够降解氨氮的菌株，进一步筛选得到1株氨氮高效降解菌LSA，经鉴定为克柔假丝酵母 （ Candida krusei ），与 Candida krusei isolate EM12（JF274497.1）的相似性达到 99%，GenBank 中的登录号 为KT025851。该菌株的对数生长期为6-12h，可在pH 3-7，20-40℃条件下生长，能够分别利用葡萄糖、乙酸钠、 淀粉、柠檬酸钠、甘露醇作为碳源，不能利用无机碳，当培养基的C/N为20时氨氮去除效果最佳。随着培养基中 初始氨氮浓度的升高，菌株 LSA 对氨氮的降解率呈现下降趋势；与之相反，氨氮降解速率则随着初始浓度的升高 呈现升高趋势。当氨氮初始浓度为327.20mg·L-1 时，60h内菌株LSA对氨氮的去除率达到71.88%，菌体含量为OD 600 2.45；当氨氮初始浓度为1 105.26mg·L-1 时，96h内菌株LSA对氨氮的去除率达到57.44%，菌体含量达到OD 2.96。 600 将其接种到鸡粪中可以显著降低鸡粪中氨氮的含量，最高可降低 22.30%；减少粪中氨气的挥发量，最高可降低 15.92%；增加粪便总氮含量；降低粪便氨氮占总氮的比重。【结论】克柔假丝酵母（ Candida krusei ）LSA菌株具 有高效氨氮降解能力和较强的环境适应性，可有效减少鸡粪中的氨氮含量，降低氨气的挥发量。 关键词：分离鉴定；克柔假丝酵母（Candida krusei ）；氨氮；鸡粪 Isolation and Characterization of Ammonia Nitrogen-Degrading Microbe from Chicken M