苹果异戊烯基转移酶基因家族MdIPTs的克隆与MdIPT5a功能分析.PDF

中国农业科学 2011,44( 19):4029-4036 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.19.013 苹果异戊烯基转移酶基因家族（MdIPTs）的克隆 与MdIPT5a 功能分析 李 皓，张 文，赵旭勉，任雪芹，朱元娣 （中国农业大学果树系，北京 100193） 摘要：【目的】克隆苹果（ Malus domestica Borkh.）异戊烯基转移酶（isopentenyltransferase，IPT）基 因家族MdIPTs，分析MdIPT5a 的生理功能，为深入研究MdIPTs 在苹果细胞分裂素生物合成途径中的作用和基因 的遗传转化提供理论依据。【方法】以‘富士’苹果为试材，利用RACE 和苹果基因组信息克隆MdIPTs；利用洋葱 表皮和拟南芥原生质体的瞬时表达研究MdIPT5a 的亚细胞定位；通过农杆菌介导法遗传转化‘W38’烟草（Nicotiana tabacum cv. Wisconsin 38）过量表达MdIPT5a，RT-PCR 鉴定转基因烟草。【结果】克隆了 10 个MdIPTs 的cDNA 序列，其中 7 个编码细胞分裂素生物合成主要途径中的腺苷-IPTs，具有N 端的保守结构域GxxGxGK[S,T]序列， 分别位于苹果第13、16、3、11、13、16、6 号染色体上，命名为MdIPT1a、MdIPT1b、MdIPT3a、MdIPT3b、MdIPT5a、 MdIPT5b 和MdIPT7a，均无内含子，编码284—370 个氨基酸。MdIPT5a-GFP 融合蛋白定位于细胞质中，但不定位 于质体内。过量表达MdIPT5a 的转基因烟草组培苗生根困难、叶片和不定芽增多。【结论】苹果中腺苷-异戊烯基 转移酶基因具有成对高度同源现象，与苹果 17 条染色体起源于9 条始祖染色体的同源起源学说相一致，MdIPT5a 具有催化合成细胞分裂素的功能。 关键词：苹果；细胞分裂素；异戊烯基转移酶；亚细胞定位；遗传转化 Molecular Cloning of Isopentenyl Transferases Genes Family in Malus domestica Borkh. and a Preliminary Functional Analysis of MdIPT5a LI Hao, ZHANG Wen, ZHAO Xu-mian, REN Xue-qin, ZHU Yuan-di （Department of Pomology, China Agricultural University, Beijing 100193) Abstract: 【Objective 】The aim of this study was to clone a multigene family encoding isopentenyl transferases in Malus domestica, and analyze the biological functions of MdIPT5a, which would provide a basis for in-depth studies of the functions of MdIPTs in cytokinin biosynthesis and genetic transformation. 【Method 】The MdIPTs were isolated from apple cultivar ‘Fuji’ by RACE based on the information of apple genome. The